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c-Jun氨基末端激酶信号传导通路调控乙醛刺激的肝星状细胞增殖、凋亡的研究

作　者: 钟显飞
导　师: 蒋明德
学　校: 第三军医大学
专　业: 消化内科学
关键词: 肝星状细胞肝纤维化乙醛细胞增殖细胞凋亡 c-Jun氨基末端激酶(JNK)
分类号: R575.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要

背景和目的肝星状细胞(hepatic stellate cell, HSC)是肝纤维化发生过程中细胞外基质(extracellular matrix, ECM)形成的主要细胞，HSC的活化、增殖及凋亡受细胞内信号传导通路的调控，近年来，肝纤维化的发病机制与HSC信号传导一直是研究的热点。对酒精性肝病的研究已证明：乙醇的代谢产物—乙醛作为有效刺激信号是激活HSC导致肝纤维化发生的关键分子。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路参与调控细胞的增殖、分化与凋亡，是丝裂原激活蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase, MAPK)家族的重要成员之一。目前就JNK信号传导通路的激活与肝纤维化发生机制的研究报道较少，有研究显示JNK信号通路的活化与肝细胞的增殖、HSC内Ⅰ胶原及其相关基因的表达密切相关。我们前期研究证实MAPK家族中的细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路是调控乙醛刺激HSC增殖的重要通道，但国内外尚未有关JNK与HSC的增殖及凋亡的研究报道。本实验旨在通过JNK特异性阻断剂SP600125作用于乙醛刺激的HSC后，观察HSC内JNK活性变化与细胞增殖、细胞凋亡的关系；初步探讨JNK信号传导通路调控HSC细胞增殖及凋亡的分子机制；以期为肝纤维化的发生和防治提供理论和实验依据。方法体外培养大鼠HSC株；采用Western blot、免疫组化法检测乙醛刺激后HSC内JNK活性的变化，和用不同剂量SP600125(20、60、100 ng／ml)对乙醛刺激HSC内JNK活性的影响；采用MTT比色法、流式细胞仪分别检测上述剂量的SP600125作用于乙醛刺激的HSC后细胞增殖及其细胞周期变化；DNA片段凝胶电泳及流式细胞仪分析SP600125对乙醛刺激后HSC的细胞凋亡的影响。结果 (1)HSC被乙醛刺激后，磷酸化JNK(phosphorylated-JNK,p-JNK)水平增第三军医人学硕士研究生论文高，细胞由Gl~S期转化增多、促进细胞增殖。与空白对照组比较，统计学分析有显著差异(尸<0.05)。 (2)浓度为20、60、100 ng/ml的Sp600125均能抑制乙醛刺激的HSe内p一JNK水平，与对照组比较有显著差异(p<0.05):同时明显阻滞细胞由Gl一S期转化，进而抑制细胞增殖。 (3)DNA凝胶电泳图谱上可见中、高浓度组(60、1 00 ng/ml)呈典型的凋亡梯形带(DNA Ladder)，而空白对照组、乙醛组和低浓度组(Zong/ml)未见梯形条带;在流式细胞仪结果中:空白对照组及乙醛组中细胞凋亡率为2.肚0.2%和6.0士0.5%(两者有显著性差异P<0.05)，经sP600125处理后细胞凋亡率上升(分别为11.1土0.4%;26.9土0.9%;”.1士1.3%)，同乙醛组相比有显著性差异(P<0.05)，故sP600125具有促进HSe凋t的作用。结论 (1)乙醛刺激HSC后，引起JNK信号传导通路活化。 (2)乙醛促进HSC增殖与JNK活化呈正相关，并呈剂量依赖性。 (3)乙醛刺激HSC后，HSC凋t增加，用sP6ool25抑制JNK信号传导通路后凋亡率明显升高。提示SP600125通过阻断JNK通路，促进HSC凋亡，故JNK信号通路可能参与了HSC的凋亡的调控。

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英文缩写一览表  4-5
英文摘要  5-7
中文摘要  7-9
论文正文 c-Jun氨基末端激酶信号传导通路调控乙醛刺激的肝星状细胞增殖及凋亡的研究  9-45
  前言  9-12
  材料与方法  12-20
  结果  20-28
  讨论  28-33
  结论  33-34
  致谢  34-35
  照片  35-40
  参考文献  40-45
文献综述  45-51
研究生期间发表论文  51

c-Jun氨基末端激酶信号传导通路调控乙醛刺激的肝星状细胞增殖、凋亡的研究

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