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莪术油及其组分对慢粒白血病细胞作用及机制的研究

作　者: 林海
导　师: 李晓辉
学　校: 第三军医大学
专　业: 药理学
关键词: K562细胞 莪术油 莪术醇 凋亡 分化 融合基因BCR/ABL 微核
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2004年
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内容摘要


慢性粒细胞性白血病（chronic myelocytic leukemia，CML）占各类白血病的20％，发病年龄分布较广，预后不良，严重危害人类生命健康。其发生与染色体易位有密切的关系。染色体t（9；22）易位形成的bcr／abl融合基因表达产物为p210蛋白，具有酪氨酸激酶活性，能够激活多条信号传导通路使细胞增殖过度，而分化和凋亡受抑制，导致CML发生、发展和恶化。bcr／abl融合基因与肿瘤细胞复发、急变及对常规化疗药物耐药性密切相关。消除融合基因bcr／abl是治疗CML，消除其耐药和复发的关键，而寻找高效低毒的新型靶向药物是CML治疗的重要课题之一。 莪术挥发油是中药莪术的提取物，莪术醇和β-榄香烯是其中两个主要组分，其中莪术醇含量最大。β-榄香烯虽具有抗肿瘤作用，但易导致患者出现恶心、食欲不振、发热、静脉炎、剧烈疼痛等不良反应，限制了其进一步的应用。以往研究表明，莪术醇对宫颈癌等肿瘤有较好的疗效，进一步研究其是否有抗肿瘤作用及作用机制有重要意义，并可能为肿瘤的治疗找到一种高效安全的新药。 本研究以人慢性粒细胞白血病细胞株K562、小鼠淋巴细胞白血病L1210细胞株为对象，研究了莪术醇、β-榄香烯及莪术油对肿瘤的作用及其机制。以MTT法测定莪术醇等对K562、L1210细胞的增殖抑制作用，并求得细胞生长曲线。用形态学、激光共聚焦及细胞内酶测定等方法测定莪术醇等诱导K562细胞凋亡、分化情况；用RT-PCR测定对K562细胞bcl-2 mRNA、bax mRNA及bcr／abl mRNA表达量的变化，同时测定莪术各组分对K562细胞微核影响。 结果：1、莪术醇、β-榄香烯及莪术油能明显地抑制K562、L1210细胞增殖。并呈明显的剂量、时间相关性。 2、莪术醇诱导K562细胞凋亡结果显示：10μg／ml莪术醇处理K562细胞12hGimsa染色后即可见细胞染色质浓聚，核裂解。激光共聚焦结果显示30μg／ml莪术醇作用24h、48h、72h的细胞凋亡率分别为28.7％、50.0％及78.3％。表明莪术醇对K562细胞的凋亡诱导作用呈一定的时间剂量依赖性。RT—PCR法检测凋亡相关基因结果表明：K562细胞本身不表达bcl-2，莪术醇、β-榄香烯及莪术油的各剂量组作用后，bcl-2表达无明显变化，而bax的表达量与对照组比有明显升高（p＜0.05）。 3、莪术醇诱导k562细胞分化结果显示：30μg／ml组及100μg／ml组作用72h第三军医大学硕士学位论文Gim诗a染色后可见K562细胞向终末细胞分化，出现杆状及分叶核细胞，细胞生长明显抑制，NBT还原能力显著增强，其他酶学指标也呈分化表现。 4、RT一PcR检测ber/abl融合基因结果显示:羲术醇30“g/ml组及100 p g/ml组的K562细胞bcr/abl的融合基因的表达量降低，与对照组比有显著性差异（P<0.户5）。而p一榄香烯对bcr/abl融合基因的表达无明显影响; ;、K562细胞的微核试验表明:获术醇 30 p g/ml及100 p g/ml组在作用48h后，微核娜与对照组比明显减少（P<0.05），p一榄香烯及获术油对微核率与空白对照组无显著差别。 结论:1、成功从荻术挥发油中提取获术醇，并用脂质体包裹;2、获术油及其组分在体外对白血病细胞具有明显的增殖抑制作用，并呈时间、浓度依赖性;3、羲术油及其组分对K562细胞具有明确的凋亡诱导作用，其机制可能与bcl一2及bax途径相关;4、获术醇能够降低ber/abl融合基因的表达，减少K562细胞的微核率，诱导李62细胞凋亡并促进分化。鉴于ber/abl是细胞染色体断裂易位所致，易位中伴有的染色体损伤可以使微核增加。获术醇能减少微核产生，降低bcr/abl融合基因的表达布能是羲术醇消除或减少了染色体bcr/abl融合基因的易位损伤，并使一部分细胞基因复原向正常分化。

全文目录


英文缩写一览表  4-5
英文摘要  5-7
中文摘要  7-9
论文正文 莪术油及其组分对慢粒白血病细胞作用及机制的研究  9-54
  前言  9-11
  第一部分 莪术醇提取与脂质体制备  11-16
    实验材料  11-12
    方法  12-13
    结果  13-14
    讨论  14-16
  第二部分 莪术油及提取物对白血病细胞的增殖抑制作用  16-25
    实验材料  16-17
    方法  17-18
    结果  18-23
    讨论  23-25
  第三部分 莪术油及其提取物抗白血病作用机制的研究  25-42
    实验材料  25-27
    方法  27-32
    结果  32-39
    讨论  39-42
  全文结论  42-43
  致谢  43-44
  照片  44-52
  参考文献  52-54
文献综述一 慢性粒细胞性白血病染色体畸变及其基因治疗的研究进展  54-64
  参考文献  62-64
文献综述二 生物技术在肿瘤治疗中的应用  64-70
攻读硕士期间论文撰写及发表  70

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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