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尼美舒利增强光动力疗法对人胆管癌细胞株QBC939体外杀伤作用的实验研究

作　者: 刘晖
导　师: 薛平
学　校: 广州医学院
专　业: 外科学
关键词: 胆管癌 光动力疗法 血卟啉 环氧合酶-2抑制剂 尼美舒利 凋亡 半胱天冬酶-3
分类号: R735.8
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


胆管癌是胆道常见的恶性肿瘤,由于临床症状出现晚、早期诊断困难,其外科根治性切除率很低,加上胆管癌对放疗和化疗均不敏感,因而预后较差。近年来,胆管癌的发病率和死亡率逐年上升,寻求新的有效的治疗方法,对于提高胆管癌的临床治疗具有十分重要的意义。光动力疗法（photodynamic therapy, PDT）是一种侵入性较小的肿瘤治疗方法,它利用肿瘤组织能够聚集光敏物质,在特定波长激光照射下,通过光化学反应,在局部产生有细胞毒性的活性氧物质（reactive oxygen species, ROSs）,从而导致细胞死亡。前期研究已发现PDT对人胆管癌细胞具有杀伤作用,但肿瘤仍有复发现象,因此,应进一步探索PDT治疗肿瘤的机制、寻找提高PDT疗效的新方法。环氧合酶（cyclooxygenase, COX）是花生四烯酸（arachidonic acid, AA）转化为前列腺素（prostaglandins, PGs）过程中的限速酶,有两种亚型,即COX-1和COX-2,两者具有不同的生物学功能。COX-1稳定表达于多种组织,而COX-2是一种诱导型酶,生理状况下在多数组织中不表达,但可被广泛的血管内外激活物如肿瘤坏死因子（TNF）、表皮生长因子（EGF）和白介素-1（IL-1）等迅速诱导表达。近年的研究发现,COX-2在结肠癌、肝癌、胆管癌等多种肿瘤中高表达,并与其发生、发展密切相关,选择性COX-2抑制剂对肿瘤细胞的生长和增殖具有抑制作用。已有的研究还发现,PDT可以刺激前列腺素E2（prostaglandin E2）的释放,PDT作用后环氧合酶-2（cyclooxygenase-2, COX-2）持续高表达,而这些现象可能被COX-2抑制剂阻断,因此,COX-2抑制剂有可能提高PDT的治疗效果。本实验通过以血卟啉衍生物（hematoporphrphyrin derivative, HpD）为光敏剂介导的PDT联合选择性COX-2抑制剂尼美舒利作用于体外培养的人胆管癌细胞株QBC939,研究HpD-PDT联合尼美舒利对人胆管癌细胞的杀伤作用及其可能的作用机制,为胆管癌的防治探索新方法。目的观察COX-2抑制剂尼美舒利增强HpD-PDT对人胆管癌细胞株QBC939的体外杀伤效果,研究HpD-PDT及其联合尼美舒利对人胆管癌细胞caspase-3活化的影响,探索HpD-PDT及其联合尼美舒利杀伤人胆管癌细胞可能的作用机制。方法实验设空白对照组、单纯HpD-PDT组、单纯尼美舒利组和联合组（先行HpD-PDT处理,后加用尼美舒利）。对体外培养的人胆管癌细胞株QBC939进行实验,应用MTT法检测其光密度值(OD570值),观察不同实验条件下HpD-PDT联合尼美舒利对人胆管癌细胞的体外杀伤作用,分析杀伤效应与HpD浓度和尼美舒利浓度的关系并绘制其生长曲线,光镜下观察细胞的形态学变化;分光光度法检测HpD-PDT及其联合尼美舒利（nimesulide）对胆管癌细胞caspase-3活性的影响。结果（1）MTT法显示HpD-PDT、尼美舒利、HpD-PDT联合尼美舒利都能抑制体外培养的QBC939细胞增殖,其效应随着药物浓度的增加和作用时间的延长而增强;（2）与单纯应用HpD-PDT或尼美舒利相比,二者联合作用QBC939细胞后,细胞凋亡现象更明显;（3）在达到对QBC939细胞同样抑制率的条件下,联合应用可以同时减少HpD和尼美舒利的使用量;（4）分光光度法显示,HpD-PDT作用QBC939细胞后能早期激活caspase-3,效应呈剂量依赖性,与时间负相关;（5）与单纯应用HpD-PDT或尼美舒利相比,二者联合作用QBC939细胞后,caspase-3的活性升高更明显,活化时间更长。结论（1）HpD-PDT能早期激活caspase-3,其效应呈剂量依赖性,表明caspase-3的激活可能是HpD-PDT杀伤人胆管癌细胞的机制之一;该效应与时间负相关,亦可解释HpD-PDT对人胆管癌细胞杀伤效应的有限性和不持久性。（2）HpD-PDT与尼美舒利联用时,细胞杀伤效应更明显,药物使用量更少,caspase-3活化程度更高、活化时间更长,说明尼美舒利能增强HpD-PDT对人胆管癌细胞的杀伤作用,该效应可能是通过HpD-PDT与尼美舒利一前一后序贯激活caspase-3,增强caspase-3的活性,延长caspase-3的活化时间完成的,caspase-3的激活可能是二者联合杀伤人胆管癌细胞的共同通路。

全文目录


中英文名词对照表  3-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
前言  10-12
第一部分 尼美舒利增强光动力疗法对人胆管癌细胞株QBC939 体外杀伤作用的实验观察  12-24
  材料和方法  12-14
  实验方法  14-17
  结果  17-21
  讨论  21-24
第二部分 光动力疗法及其联合尼美舒利对人胆管癌细胞caspase-3 活性的影响  24-33
  材料和方法  24-25
  实验方法  25-27
  结果  27-30
  讨论  30-33
全文总结  33-35
参考文献  35-38
附图  38-41
综述  41-49
   参考文献  45-49
致谢  49-50

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胆囊、胆道肿瘤
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