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基于目标成分“敲出/敲入”质量控制模式的中药姜黄抗氧化药效物质辨识

作　者: 何静
导　师: 李宝才；肖小河
学　校: 昆明理工大学
专　业: 药物化学
关键词: 中药质量控制药效物质辨识成分敲出/敲入生物活性测定抗氧化姜黄模式和方法
分类号: R285
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

为了寻求解决中药药效物质辨识和质量控制问题的新突破,本研究以临床应用广泛、疗效确切、药效物质相对明确的中药姜黄为模型药物,选择其较具代表性的且是近年活性研究热点的抗氧化活性为切入点,探索“基于目标成分敲出／敲入的中药药效物质辨识与质量控制模式”,对现行中药质量控制与评价方法进行补充和完善,保障中药有效性和安全性。研究分别采用薄层色谱分离法制备姜黄素类目标成分敲出样品和超临界萃取法制备姜黄挥发油类目标成分敲出样品。建立样品的超高效液相色谱检测方法,对不同姜黄目标成分敲出样品进行初步化学分析,为后期谱-效关系分析和样品化学指纹图谱的建立奠定研究基础。初步建立中药抗氧化活性测定方法,利用中心复合设计-效应面优化法对方法条件进行优化,获得方法最优化条件为：Fe(Ⅱ)浓度,150μM; AsAH2/Fe(Ⅱ)摩尔比率,2.09/1-2.62/1；TBA显色反应时间,90 min；并系统地研究了反应体系内pH值、样品溶剂和表面活性剂等各因素对方法的影响。该方法可符合“基于目标成分敲出/敲入的中药药效物质辨识与质量控制模式”提出的药效评价试验和方法最好能与功效关联性好、高效、灵敏、快速,既能定性又能定量的要求。采用所建中药抗氧化活性测定方法对不同目标成分敲出姜黄样品的抗氧化活性进行测定,以分层次的方差分析评价不同姜黄成分对姜黄抗氧化药效的贡献度,并用氧化应激损伤PC12细胞的保护作用实验验证研究结果,最终实现姜黄抗氧化活性药效物质辨识,即：姜黄抗氧化药效物质为姜黄素和去甲氧基姜黄素。初步探讨了基于目标成分敲出/敲入的中药药效物质辨识与质量控制模式的可行性、合理性和科学性。上述研究结果表明,“基于目标成分敲出/敲入的中药药效物质辨识与质量控制模式”充分体现中医药的整体观、系统观的特点和优势,阐释了传统中医药理论的精髓,为实现中药有效质量控制提供了研究思路和技术支撑,其应用价值已初步显现。

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摘要 4-5ABSTRACT 5-7目录 7-13第一章绪论 13-29 1.1 中药药效物质辨识与质量控制模式的现状 14-15 1.1.1 现行中药质量控制模式和方法的局限性 14 1.1.2 中药药效物质辨识是中药质量控制的基础 14-15 1.2 基于目标成分“敲出/敲入”的中药药效物质辨识和质量控制模式的提出 15-19 1.2.1 基于目标成分敲出的中药谱-效关系与药效物质辨识 17-18 1.2.2 基于目标成分敲入的中药量-效关系与质量控制 18-19 1.2.3 基于目标成分“敲出/敲入”的中药药效物质辨识和质量控制模式的关键技术问题 19 1.3 模式药物及其活性评价的选择 19-26 1.3.1 确定姜黄为模式药物的依据 19-20 1.3.2 模式药物姜黄的研究概述 20-24 1.3.3 模式药物姜黄抗氧化活性评价的研究意义 24-26 1.4 本课题立题依据 26 1.5 本课题的研究内容及技术路线 26-29 1.5.1 研究内容 26-27 1.5.2 技术路线 27-29第二章样品制备与化学分析 29-42 2.1 姜黄样品的制备 29 2.1.1 姜黄道地优级药材 29 2.1.2 姜黄总醇提液的制备 29 2.2 姜黄目标成分敲出样品制备 29-32 2.2.1 制备薄层层析条件 29-30 2.2.2 姜黄素类目标成分敲出样品制备 30-31 2.2.3 姜黄挥发油类目标成分敲出样品制备 31-32 2.3 不同姜黄样品的化学分析 32-41 2.3.1 仪器与试剂 32 2.3.2 色谱条件 32 2.3.3 供试品溶液制备 32-33 2.3.4 检测波长的优化 33-34 2.3.5 不同姜黄样品UPLC图谱与比较 34-41 2.4 结论 41-42第三章中药抗氧化活性测定方法的初建 42-63 3.1 中药抗氧化评价方法 42-44 3.1.1 几种中药抗氧化评价方法 42-43 3.1.2 肝微粒体脂质过氧化试验 43 3.1.3 中药生物活性测定方法原则 43-44 3.2 实验动物、实验仪器及试剂材料 44-45 3.2.1 实验动物 44 3.2.2 主要实验仪器 44 3.2.3 主要试剂及材料 44-45 3.3 中药抗氧化活性测定方法初建 45-50 3.3.1 鼠肝微粒体制备 45 3.3.2 高通量肝微粒体脂质过氧化试验 45-46 3.3.3 单因素考查 46-47 3.3.4 方法条件优化 47-48 3.3.5 三氯乙酸与样品溶剂对方法的影响 48-49 3.3.6 表面活性剂对方法的影响 49 3.3.7 方法的初步应用 49 3.3.8 数据学统计分析 49-50 3.4 结果与分析 50-61 3.4.1 抗氧化活性测定方法 50-51 3.4.2 单因素考查 51-52 3.4.3 方法条件优化 52-57 3.4.4 三氯乙酸与样品溶剂对方法的影响 57-58 3.4.5 表面活性剂对方法的影响 58-59 3.4.6 姜黄素、去甲氧基姜黄素和没食子酸的抗氧化活性测定 59-61 3.5 结论 61-63第四章基于目标成分“敲出/敲入”质量控制模式和中药抗氧化活性测定方法的姜黄抗氧化药效物质辨识 63-75 4.1 主要实验仪器及试剂材料 63-64 4.1.1 主要实验仪器 63 4.1.2 主要试剂及材料 63-64 4.2 实验方法 64-65 4.2.1 不同姜黄样品制备 64 4.2.2 方法 64-65 4.2.3 数据统计学分析 65 4.3 结果与分析 65-73 4.3.1 不同姜黄样品的抗氧化活性测定 65-69 4.3.2 不同姜黄样品的抗氧化活性方差分析 69-73 4.3.3 基于目标成分“敲出/敲入”质量控制模式和中药抗氧化活性测定方法的姜黄抗氧化药效物质辨识 73 4.4 结论 73-75第五章姜黄对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用及其药效物质辨识 75-84 5.1 氧化应激损伤PC12细胞实验 75-76 5.1.1 PC12细胞 75 5.1.2 H_2O_2诱导损伤PC12细胞模型 75-76 5.2 实验细胞、实验仪器及试剂材料 76-77 5.2.1 实验细胞 76 5.2.2 主要实验仪器 76 5.2.3 主要试剂及材料 76-77 5.3 实验方法 77-78 5.3.1 主要试剂的配制 77 5.3.2 不同姜黄样品制备 77 5.3.3 方法 77-78 5.3.4 数据统计学分析 78 5.4 结果与分析 78-82 5.4.1 形态学观察 78-80 5.4.2 MTT法测定不同姜黄样品对氧化应激损伤PC12细胞的保护作用 80-81 5.4.3 姜黄对氧化应激损伤PC12细胞保护作用的药效物质辨识 81 5.4.4 抗氧化活性与氧化应激损伤PC12细胞保护作用关联分析 81-82 5.5 结论 82-84第六章结语与展望 84-87 6.1 结论 84-86 6.2 展望 86-87致谢 87-88参考文献 88-95附录A 攻读硕士期间发表论文和科研情况目录 95

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