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黄芪多糖、淫羊藿多糖及淫羊藿总黄酮对NDV、IBDV活性的影响

作　者: 任宇皓
导　师: 胡元亮
学　校: 南京农业大学
专　业: 临床兽医学
关键词: 黄芪多糖淫羊藿多糖淫羊藿总黄酮【NDV IBDV CEF 增殖存活率血凝性。
分类号: S853.74
类　型: 硕士论文
年　份: 2000年
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内容摘要

本研究观察了黄芪多糖（APS）、淫羊藿多糖（EPS）和淫羊藿总黄酮（EF）三种中药成分对鸡新城疫病毒（NDV）及法氏囊病毒（IBDV）增殖的影响。具体内容包括以下四部分。 1、以蒙古黄芪、朝鲜淫羊藿的叶为材料，用水煎醇沉法提取了黄芪多糖（APS）和淫羊藿多糖（EPS）的粗提物，并用硫酸蒽酮法测定了其中两种多糖的含量；用水煎醇沉、氯仿-乙酸乙酯萃取、聚丙酰胺柱层析法粗提了淫羊藿总黄酮（EF）。并用芦丁法测定了其净含量；同时比较了水煎不同加水量（25、50、75、100倍）、不同醇沉浓度（30％、60％、80％含醇量）和不同沉淀温度（4℃、25℃静置）对EPS提取率的影响。结果表明，3种中药成分的粗提取率分别为2.6g/Kg、5.2g/Kg和1.5g/Kg，其净含量分别为50.2％、53.2％和70.1％；加50倍水煎煮、60％醇沉浓度、4℃静置时提取率最高。 2．为了测定三种中药成分对培养细胞--鸡胚成纤维细胞（CEF）的安全浓度，将EPS、APS分别加入培养12小时尚未形成单层和培养24小时已形成单层后的CEF中，观察CEF增殖与存活时间。结果表明，APS与EPS能促进CEF增殖并延长存活时间。对未形成单层的CEF，增殖率在加入6小时后微低于对照、18小时后显著高于对照组，且EPS组明显高于APS组；对已形成单层CEF，增殖率在加入6小时后也微低于对照组；EPS延长CEF的存活的作用更为显著；两者均存在一定量效关系，高浓度的EPS对CEF有一定的毒性，最大无毒浓度为450μg/ml。EF对CEF有一定的毒性，已形成单层的CEF没有促进增殖和延长存活作用；对未形成单层CEF在高浓度时呈现一定的抑制增殖作用；EF最大无毒浓度为300μg/ml。 3．将不同浓度的APS、EF和新城疫病毒（NDV）、法氏囊病毒（IBDV）分别以如下方式加入CEF单层：①先加药物、后加病毒，②先加病毒、后加药物，③病毒和药物感作后加入。测定鸡胚细胞半数致病变量（TCID50）和NDV的血凝效价。观察上述三种中药对NDV、IBDV增殖的影响。结果表明，APS、EPS对NDV只有在先加入药物、后加入病毒这一方式中表现出一定的抑制病毒增殖的作用。而EF在上述三种加药方式中，对这两种病毒增殖均表现出一定的的抑制作用。 4．不同浓度的APS、EPS、EF与NDV在体外感作和不感作，测定NDV对鸡红细胞的凝集效价及凝集时间。结果发现，EPS、APS、EF可提高NDV的血凝效价，分别比对照组提高7、3、1倍；EPS可明显延长凝集时间，APS和EF无明显影响。同时发现，EF在高浓度时本身也有一定的血凝特性。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-8
前言  8-9
第一篇文献综述  9-22
  1 黄芪对机体代谢的影响  9-11
  2 黄芪抗衰老作用  11-12
  3 淫羊藿对代谢的影响  12-13
  4 淫羊藿抗衰老作用  13
  5 黄芪多糖（APS）的免疫研究进展  13
  6 APS对病毒的作用  13-14
  7 淫羊藿多糖（EPS）的免疫研究进展  14-15
  8 淫羊藿黄酮（EF）的免疫研究进展  15
  9 EPS与EF对免疫功能的作用比较  15
  10 ICA、EPS对病毒的影响  15
  11 疫苗保护剂的作用机理及研究进展  15-16
  12 免疫佐剂的作用机理及研究进展  16-17
  13 中药免疫调节剂的研究进展  17-22
第二篇研究报告  22-56
  第一部分黄芪多糖、淫羊藿多糖和淫羊藿总黄酮的提取制备  22-28
    摘要  22
    1 材料与方法  22-24
      1．1 中药材  22
      1．2 主要试剂  22-23
      1．3 主要仪器  23
      1．4 淫羊藿多糖提取条件的比较  23
      1．5 黄芪多糖的提取及含量测定  23
      1．6 淫羊藿多糖的提取及含量测定  23-24
      1．7 淫羊藿总黄酮的提取及含量测定  24
    2 结果  24-25
      2．1 不同条件对EPS提取率的影响  24-25
      2．2 三种中药成分的粗提率及净含量  25
    3 讨论  25-28
  第二部分黄芪多糖、淫羊藿多糖和淫羊藿总黄酮对鸡胚成纤维细胞安全浓度的测定  28-38
    摘要  28
    1 材料与方法  28-30
      1．1 试验药物  28
      1．2 试剂  28-29
      1．3 试验器材  29
      1．4 鸡胚成纤维细胞的制作  29
      1．5 细胞毒性试验  29
      1．6 细胞增殖试验  29-30
      1．7 细胞存活时间观察  30
    2 结果与分析  30-35
      2．1 细胞毒性  30
      2．2 未完全形成单层加入药物观察药物对细胞的增殖  30-32
      2．3 完全形成单层加入药物的细胞增殖率  32-34
      2．4 药物对细胞存活时间的影响  34-35
    3 讨论  35-38
  第三部分黄芪多糖、淫羊藿多糖和淫羊藿总黄酮对NDV和IBDV增殖的影响  38-50
    摘要  38
    1 材料与方法  38-41
      1．1 试验药物  38-39
      1．2 方法  39-41
      1．3 数据统计  41
    2 结果与分析  41-47
      2．1 先加药物后加病毒对NDVⅠ系增殖的影响  41-42
      2．2 先加病毒后加药物对NDV Ⅰ系增殖的影响  42-43
      2．3 感作后同时加入对NDV Ⅰ系增殖的影响  43
      2．4 先加药物后加病毒对NDV Ⅳ系增殖的影响  43-45
      2．5 先加病毒后加药物对NDV Ⅳ系增殖的影响  45
      2．6 感作后同时加入对NDV Ⅳ增殖的影响  45-46
      2．7 EF对IBDV增殖的影响  46-47
    3 讨论  47-50
  第四部分黄芪多糖、淫羊藿多糖和淫羊藿总黄酮对NDV的血凝性的影响  50-56
    1 材料与方法  50-51
      1．1 材料  50
      1．2 方法  50-51
    2．结果与分析  51-53
      2．1 药物对NDV血凝效价的影响  51-53
      2．2 药物对红细胞的血凝性  53
    3 讨论  53-56
全文结论  56-57
参考文献  57-62
致谢  62

黄芪多糖、淫羊藿多糖及淫羊藿总黄酮对NDV、IBDV活性的影响

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