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榄香烯体内外抑制小鼠肝癌H₂₂细胞增殖与诱导凋亡作用的研究

作　者: 季娜
导　师: 张红
学　校: 大连医科大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 肝癌H22 小鼠榄香烯增殖凋亡
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:研究中药莪术提取物榄香烯制剂（Elemene）对小鼠肝癌H₂₂细胞增殖的抑制作用及其抑制的途径是通过诱导细胞凋亡来实现的。方法:将35只健康清洁的Balb/C小鼠,随机分为5组:榄香烯高剂量组（100 mg/kg）,榄香烯低剂量组（50 mg /kg）,榄香烯（50 mg /kg）联合5-FU（20 mg/kg）组,5-FU组（20 mg/kg）,正常对照组（0.9%氯化钠0.2 ml/只）。体内实验是通过建立H₂₂小鼠肝癌实体瘤模型,观察榄香烯对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用,TdT酶介导的原位缺口末端标记法（TUNEL）检测凋亡细胞。体外进行细胞培养,采用MTT法检测榄香烯对细胞增殖的抑制作用,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞的早期凋亡。结果:不同实验组对荷瘤小鼠肿瘤生长的抑制作用程度不同,5-氟脲嘧啶组抑制肿瘤生长作用最明显,榄香烯高剂量组较低剂量组抑瘤效果明显。可以观察到在用药后的第1天各治疗组小鼠瘤体积与对照组比较无明显差异,在用药第3天5-FU组、联合组小鼠瘤体积与对照组比较差异有统计学意义（* P< 0.05）,在接下来的第5、7、9天4组用药组小鼠瘤体积与对照组比较差异均具有统计学意义（* P< 0.05, ** P <0.01）。MTT法检测到榄香烯对H₂₂细胞的活力具有抑制作用,并且呈剂量和作用时间的依赖性,不同浓度的榄香烯（100、50、25、12.5、6.25μg/ml）作用于H₂₂细胞24、48、72 h后,榄香烯组与对照组比较差异均有统计学意义（* P< 0.05, ** P <0.01）; Annexin V- FITC/PI法检测到早期凋亡细胞,随着药物作用时间及浓度的增加,凋亡率也随之增加。当作用时间为24h时时,榄香烯高剂量、低剂量组分别与对照组比较差异具有显著性（* P< 0.05）;当作用时间延长至48h时,榄香烯高剂量、低剂量组分别与对照组比较差异具有显著性（* P< 0.05）。TUNEL法检测到凋亡细胞,榄香烯组与对照组比较差异均有统计学意义（* P< 0.05）。结论:不同浓度的榄香烯均可有效抑制小鼠肝癌H₂₂细胞的增殖,随着榄香烯浓度的增加及作用时间的延长,细胞的活力在降低。采用Annexin V- FITC/PI法经过流式细胞仪的检测,其抑制癌细胞增殖的途径可能是通过诱导细胞发生凋亡而完成的。进一步行TdT酶介导的原经缺口末端标志法（TUNEL）检测到凋亡细胞,再一次证实其诱导凋亡抑制癌细胞增殖的途径。但对于其具体的内在机制及相关蛋白,仍需要进一步的深入研究。

全文目录

摘要 6-8Abstract 8-10前言 10材料和方法 10-13结果 13-16讨论 16-21结论 21-22参考文献 22-24综述 24-31 参考文献 29-31附录 31-33致谢 33

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