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PCV2分离株增殖特性研究及板蓝根多糖、黄芪多糖对PCV2体外复制的影响

作　者: 李志娟
导　师: 陈陆
学　校: 河南农业大学
专　业: 预防兽医学
关键词: 猪圆环病毒2型 增殖特性 荧光定量PCR 板蓝根多糖 黄芪多糖 抗病毒作用
分类号: S858.28
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)体外繁殖能力差,病毒感染细胞后增殖滴度低,且不产生细胞病变,病毒感染动物临床表现不一,组织中病毒载量差异大。为了建立定量检测PCV2及增殖滴度的方法,本研究采用SYBR GreenⅠ随机结合法,利用常规PCR扩增出PCV2 ORF2保守区域276bp片段,将其克隆到pMD-18载体,构建重组质粒p-18T-276,并用作标准质粒模板优化反应条件,建立一种PCV2 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。结果表明,标准品模板在5.60×10~1～2.74×10~9 copies/μL时与Ct值呈良好的线性关系,相关系数为-1.00,斜率为-3.345。所建立的方法与猪圆环病毒1型、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖障碍与呼吸系统综合征病毒、猪细小病毒和猪瘟病毒均无交叉反应。应用建立的PCV2 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法对PCV2感染细胞后的复制情况进行了研究,结果显示,在感染细胞96h时,PCV2复制达到最高点。此外,利用建立的方法对本室保存的11个分离株在PK15细胞上繁殖特性进行了研究,筛选到了4株高滴度毒株(河南株5、太平株、瑞丰株、宜阳株),丰富了圆环病毒疫苗株的研究资源。选择8株毒株,以大致相等的拷贝数分别攻毒6周龄SPF昆明鼠,14天时剖杀并定量检测PCV2在不同器官中的组织载量,发现河南株5和瑞丰株、太平株在靶组织中具有更高的增殖滴度。为了测定板蓝根多糖、黄芪多糖体外抗PCV2的效果,本试验按不同的加药方式设计了2组试验,第1组先接种病毒后加药物,以观察药物能否对细胞内的病毒起作用,抑制其生物合成及成熟释放;第2组先加药物后接种病毒,以观察药物能否阻断病毒的吸附和进入。结果表明,板蓝根多糖对PCV2具有抑制和阻断作用,其最小抑制浓度和最小阻断浓度分别为9.375μg/mL和2.344μg/mL;黄芪多糖对PCV2亦有抑制作用和阻断作用,其最小抑制浓度和最小阻断浓度分别为18.750μg/mL和2.344μg/mL。

全文目录


致谢  5-8中文摘要  8-9文献综述  9-16  1 猪圆环病毒病原学简述  9  2 猪圆环病毒的分子生物学特性  9-11    2.1 PCV 的基因组结构  9-10    2.2 PCV 编码蛋白  10-11  3 PCV2 感染的流行病学特征  11-12  4 PCV2 致病机理的研究进展  12-13    4.1 PCV2 的感染在不同的妊娠阶段有不同的组织嗜性  12    4.2 树突状细胞起着储存PCV2 的作用  12-13    4.3 其他病原对疾病发展的促进和诱导  13    4.4 免疫刺激可能引发PCV2  13  5 PCV2 的疫苗现状及展望  13-16实验一 SYBR Green Ⅰ 荧光定量PCR 检测猪圆环病毒2 型方法的建立  16-22  引言  16  1 材料与方法  16-17  2 结果  17-20  3 小结与讨论  20-22实验二 PCV2 分离株增殖特性的研究  22-32  引言  22  1 材料与方法  22-24  2 结果  24-30  3 小结与讨论  30-32实验三 黄芪多糖、板蓝根多糖对PCV2 体外复制的影响  32-41  引言  32  1 材料与方法  32-33  2 结果  33-39  3 小结与讨论  39-41全文总结  41-42参考文献  42-48英文摘要  48-49

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家畜 > 猪
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