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黑芝麻中抗菌蛋白的分离纯化及其主要性质

作　者: 崔晓慧
导　师: 唐益雄
学　校: 中国农业科学院
专　业: 分子生物学及生物化学
关键词: 黑芝麻 抗菌蛋白 纯化 抑菌活性
分类号: S565.303.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2000年
下　载: 301次
引　用: 2次
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内容摘要


许多植物都具有内源组成型表达的抗菌蛋白。这些抗菌蛋白不但有强的抗菌活性，而且抗菌谱广，在植物病害防治中越来越受重视。首先这些抗菌蛋白纯化之后可以直接用做“生化试剂”，其次可以通过测定抗菌蛋白的序列从而在原植物中克隆出其基因，这是在植物抗病基因工程中抗病基因的一个重要来源。由于这些抗菌蛋白都源于植物内源表达的基因，所以从转基因植物安全性的角度上考虑更易于被群众接受、消除他们对转基因食物的疑虑心理。 本实验利用低压Bio-Rad ECONO层析系统、BIO-CAD高压液相层析系统，通过Fastflow Q阴离子柱层析和POROS Q 20阴离子柱层析及分子排阻层析从黑芝麻中提取出了一种对多种真菌有很强抗性的抗菌蛋白，该蛋白对不同真菌抑制的IC50因不同真菌而有所不同，初步检测对菜豆枯萎有强的抗性，其IC50要小于28μg/ml；对棉花炭疽、木霉也有显著活性，但IC50明显增大；不抗棉花黄萎和小麦赤霉菌。该蛋白在聚丙烯酰胺凝胶电泳中表现单一条带，分子量约为31KD。进一步实验发现此蛋白对蛋白酶K有抗性，但不耐高温，加热后其抑菌活性丧失很快。 从黑芝麻中提取内源表达的高效、广谱抗菌蛋白的工作国内、外刊物中尚未见报导。关于该蛋白的一些其它特性尚有待于进一步研究以其了解其抗菌机理，从而更好地利用它为人类服务。

全文目录


中文摘要  5-6
英文摘要  6-7
1． 综述  7-26
  1． 几丁质酶  8-26
    1．2 β-1,3葡聚糖酶  8-9
    1．3 核糖体失活蛋白  9-10
    1．4 几丁质结合蛋白  10-12
      1．4．1 植物外源凝集素  10-11
      1．4．2 Hevein型和Knottin型几丁质结合蛋白  11-12
      1．4．3 Ac-AMP_1和Ac-AMP_2蛋白  12
    1．5 蛋白酶抑制剂  12-13
    1．6 抗菌蛋白Permatins  13
    1．7 抗菌活性肽  13-24
      1．7．1 Thionins  14-16
      1．7．2 Plant defensins  16-18
      1．7．3 脂质穿梭蛋白  18-21
      1．7．4 四半胱氨酸型抗菌多肽  21-22
      1．7．5 Albumin-type proteins  22-24
    1．8 本实验的目的  24-26
2． 抗菌蛋白的初筛选  26-34
  2．1 材料与方法  26-30
    2．1．1 实验材料的准备  26
    2．1．2 仪器试剂  26-27
    2．1．3 粗蛋白的提  27-29
    2．1．4 抑菌活性的检测  29-30
  2．2 结果与分析  30-34
3． 黑芝麻中抗菌蛋白的纯化  34-46
  3．1 实验方法步骤  34-37
    3．1．1 材料的准备  34
    3．1．2 粗蛋白的提取  34
    3．1．3 低压阴离子柱层析  34-35
    3．1．4 HPLC阴离子柱层析  35-36
    3．1．5 分子排阻层析  36-37
  3．2 结果与讨论  37-46
    3．2．1 样品C低压阴离子柱层析  37-40
    3．2．2 对BS—Ⅱ的高压液相柱层析分离  40-43
    3．2．3 对样品P_2分子排阻层析  43-45
    3．2．4 小结  45-46
4． 抗菌蛋白BS-P_2的主要性质分析  46-62
  4．1 实验方法步骤  46-50
    4．1．1 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳  46-47
    4．1．2 抗菌蛋白样品BS-P_2浓度的测定  47-48
    4．1．3 抗菌蛋白稳定性实验  48-49
    4．1．4 抗菌蛋白抗菌活性  49
    4．1．5 抗菌蛋白IC_（50）的测定  49-50
    4．1．6 抗菌蛋白在不同时间内对真菌生长的抑制情况  50
  4．2 结果与讨论  50-62
    4．2．1 聚丙烯酰胺凝胶电泳  50
    4．2．2 抗菌蛋白稳定性实验  50-52
    4．2．3 抗菌蛋白BS-P_2抑菌活性  52-58
    4．2．4 抗菌蛋白的IC_（50）的测定  58-59
    4．2．5 抗菌蛋白在不同时间内对真菌生长的抑制情况  59-61
    4．2．6 小结  61-62
5． 讨论  62-64
参考文献  64-79

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 油料作物 > 芝麻（脂麻）
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