学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

蛇鲻（Saurida elongata）消化蛋白酶的研究

作　者: 颜伟
导　师: 李来好；薛长湖；吴燕燕
学　校: 中国海洋大学
专　业: 水产品加工与贮藏工程
关键词: 蛇鲻(Saurida elongata ) 消化蛋白酶 分离纯化 性质研究 水解蛋白
分类号: S917.4
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
下　载: 49次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


蛇鲻作为一种肉食性鱼类,其消化道中蛋白酶的含量非常丰富。本论文采用生化方法和电泳技术对蛇鲻消化蛋白酶进行了研究,首先对胃,肠中蛋白酶的性质做了的初步研究,然后对其主要蛋白酶进行了纯化和理化性质的研究,最后对消化蛋白酶的应用做了初步探讨。研究结果如下:首先对蛇鲻消化道蛋白酶的性质进行了初步的研究。分别研究了pH值、温度、抑制剂等因素对蛋白酶活性的影响。实验结果表明,在蛇鲻消化道中主要存在两种类型的蛋白酶,一类是胃酸性蛋白酶,一类是肠碱性蛋白酶,其最适pH值分别为2.0和10.0,最适温度分别为40℃～45℃和50℃。通过温度对酶活性的影响实验,两种类型的蛋白酶都具有较高的热稳定性,并且较高的温度（50℃）对肠蛋白酶有一定的激活作用。PMSF和Pepstatin A能完全抑制胃中蛋白酶的活性,PCMB也能部分的抑制其活性,而EDTA和Trypsin inhibitor对其没有影响;EDTA、Pepstatin A、PCMB对蛇鲻肠蛋白酶活性基本上没有影响,PMSF和Trypsin Inhibitor则可以强烈的抑制其活性。通过蛋白酶谱分析,在胃中存在两种蛋白酶的同工酶,分子量较为接近;肠中存在四种蛋白酶的同工酶。蛇鲻胃蛋白酶粗酶液经硫酸铵沉淀,HitrapTM Q FF离子交换层析,Sephadex G-100凝胶过滤层析,得到其纯品,纯化倍数为37.8倍,回收率为30.5%。经SDS-PAGE显示为单一谱带,酶的亚基分子量为37.7kDa;测得其最适温度为45℃,最适pH值为2.2;酶的热稳定性良好,在40℃及以下温度处理3h酶活没有任何变化;酶在pH 1～10以下都比较稳定,在强碱性条件下不稳定;以酪蛋白为底物测得酶的Km值和Vmax值分别为2.25g/L和8.772μg/min;Ca2+,Mn2+、Mg2+、Ba2+对酶活性影响不大,Hg2+对酶有较弱的抑制作用,Zn2+、Cu2+、Fe3+对酶的抑制作用较强;EDTA和Trypsin inhibitor对酶没有明显的抑制作用,PMSF和Pepstatin A能完全抑制其活性,PCMB和2,3-丁二酮对酶活性也有一定的抑制作用,其它试剂如2-ME、BrAc和TNBS作用酶时,对酶活基本上没有影响。蛇鲻肠蛋白酶粗酶液经CCl4脱脂,Sephadex G-100凝胶过滤层析和HitrapTM Q FF离子交换层析,得到其纯品,纯化倍数为5.87倍,回收率为11.58%。经SDS-PAGE显示为单一谱带,酶的亚基分子量为23.3kDa;测得其最适温度为50℃,最适pH值为10.0;酶的热稳定性良好,在40℃及以下温度处理3h酶活没有任何变化;酶在pH5～11的范围内比较稳定,在酸性和强碱性条件下不稳定;以酪蛋白为底物测得酶的Km值和Vmax值分别为3.32 g/L和31.75μg/min;Ca2+、Mn2+对酶活影响不大,Fe3+、Hg2+、Cu2+对酶有很强的抑制作用;PMSF、Trypsin inhibitor和NBS能完全抑制其活性,PCMB和Pepstatin A对其没有明显的抑制作用。以蛇鲻消化蛋白酶提取液为原料对蛇鲻肌肉进行了水解实验。通过不同温度下的水解实验表明,蛇鲻胃蛋白酶提取液和肠蛋白酶提取液水解蛇鲻肌肉的最佳温度分别为40℃和50℃;通过与几种商品蛋白酶进行比较,蛇鲻胃蛋白酶提取液的水解效果一般,肠蛋白酶提取液的水解效果较好,是其它几种酶的3～5倍;一定浓度的Na+（0.1mol/L）能够促进蛇鲻消化蛋白酶的水解作用,K+和Ca2+对水解作用的影响不大。

全文目录


摘要  5-7
Abstract  7-12
前言  12-14
第一章 文献综述  14-28
  1 蛋白酶  14-15
    1.1 蛋白酶的定义  14
    1.2 蛋白酶的分类  14-15
    1.3 蛋白酶在食品工业中的应用  15
  2 消化蛋白酶的研究进展  15-23
    2.1 消化蛋白酶的分类  16-18
      2.1.1 胃蛋白酶（Pepsin）  16
      2.1.2 胰蛋白酶（Trypsin）  16-17
      2.1.3 糜蛋白酶（Chymotrypsin）  17-18
      2.1.4 凝乳酶（Rennin）  18
    2.2 消化蛋白酶的作用专一性  18-20
    2.3 鱼类消化蛋白酶的研究进展与展望  20-23
      2.3.1 胃蛋白酶  20-21
      2.3.2 胰蛋白酶  21-22
      2.3.3 糜蛋白酶  22
      2.3.4 弹性蛋白酶  22-23
  参考文献  23-28
第二章 蛇鲻消化道蛋白酶的初步研究  28-40
  1 材料与方法  28-31
    1.1 实验材料  28-29
      1.1.1 原料  28
      1.1.2 药品与试剂  28
      1.1.3 仪器设备  28-29
    1.2 实验方法  29-31
      1.2.1 粗酶液的制备  29
      1.2.2 蛋白酶活力的测定  29
      1.2.3 蛇鲻消化蛋白酶的pH 特性  29-30
      1.2.4 温度对蛇鲻消化蛋白酶活力的影响  30
      1.2.5 抑制剂对蛇鲻消化蛋白酶活力的影响  30
      1.2.6 蛋白酶谱的测定  30-31
  2 结果与分析  31-36
    2.1 蛇鲻消化蛋白酶的PH 特性  31
    2.2 蛇鲻胃和肠蛋白酶活力的比较  31-32
    2.3 温度对蛇鲻消化蛋白酶活力的影响  32-34
      2.3.1 蛇鲻消化蛋白酶的作用最适温度  32-33
      2.3.2 蛇鲻消化蛋白酶的温度耐受性  33-34
    2.4 抑制剂对蛇鲻消化蛋白酶活力的影响  34-35
    2.5 蛇鲻消化道蛋白酶谱分析  35-36
  3 讨论  36-37
  4 小结  37-38
  参考文献  38-40
第三章 蛇鲻胃蛋白酶的分离纯化和性质研究  40-59
  1 材料与方法  40-44
    1.1 实验材料  40-41
      1.1.1 原料  40
      1.1.2 药品与试剂  40-41
      1.1.3 仪器设备  41
    1.2 实验方法  41-44
      1.2.1 粗酶液的制备  41
      1.2.2 蛋白酶活力的测定  41
      1.2.3 蛋白质含量的测定  41
      1.2.4 蛇鲻胃蛋白酶的分离纯化  41-42
      1.2.5 蛇鲻胃蛋白酶的性质研究  42-44
  2 结果与分析  44-55
    2.1 蛇鲻胃蛋白酶的分离纯化  44-46
      2.1.1 胃蛋白酶的硫酸铵分级沉淀  44
      2.1.2 胃蛋白酶的阴离子交换层析  44-46
      2.1.3 胃蛋白酶的凝胶层析  46
    2.2 蛇鲻胃蛋白酶的生化特性  46-55
      2.2.1 胃蛋白酶分子量的测定  46-47
      2.2.2 胃蛋白酶的最适反应pH 和酸碱稳定性  47-48
      2.2.3 胃蛋白酶的最适反应温度和温度稳定性  48-50
      2.2.4 胃蛋白酶的酶促反应动力学参数  50
      2.2.5 金属离子对胃蛋白酶活性的影响  50-51
      2.2.6 酶活性中心的化学修饰  51-55
  3 讨论  55-57
  4 小结  57
  参考文献  57-59
第四章 蛇鲻肠道蛋白酶的分离纯化和性质研究  59-73
  1 材料与方法  59-61
    1.1 试验材料  59
    1.2 实验方法  59-61
      1.2.1 粗酶液的制备  59
      1.2.2 蛋白酶活力的测定  59
      1.2.3 蛋白质含量的测定  59
      1.2.4 蛇鲻肠蛋白酶的分离纯化  59-60
      1.2.5 蛇鲻肠蛋白酶的性质研究  60-61
  2 结果与分析  61-69
    2.1 蛇鲻肠蛋白酶的分离纯化  61-63
      2.1.1 Sephadex G-100 凝胶过滤层析  61
      2.1.2 Q FF 阴离子交换层析  61-63
    2.2 蛇鲻肠蛋白酶的生化特性  63-69
      2.2.1 蛇鲻肠蛋白酶分子量的测定  63
      2.2.2 蛇鲻肠蛋白酶的最适pH 和酸碱稳定性  63-64
      2.2.3 蛇鲻肠蛋白酶的最适反应温度和热稳定性  64-66
      2.2.4 蛇鲻肠蛋白酶的酶促反应动力学参数  66
      2.2.5 金属离子对蛇鲻肠蛋白酶活性的影响  66-67
      2.2.6 抑制剂对蛇鲻肠蛋白酶活性的影响  67-69
  3 讨论  69-70
  4 小结  70-71
  参考文献  71-73
第五章 蛇鲻消化蛋白酶水解蛇鲻肌肉的研究  73-81
  1 材料与方法  73-76
    1.1 实验材料  73-74
      1.1.1 原料  73
      1.1.2 药品与试剂  73-74
      1.1.3 仪器设备  74
    1.2 实验方法  74-76
      1.2.1 酶活性的测定  74
      1.2.2 水解底物的准备  74
      1.2.3 水解实验步骤  74-75
      1.2.4 α-氨基氮的测定  75-76
  2 结果与分析  76-79
    2.1 温度对蛇鲻消化蛋白酶水解作用的影响  76-77
    2.2 几种不同蛋白酶水解蛇鲻肌肉蛋白的比较  77-78
    2.3 几种金属离子对蛇鲻消化蛋白酶水解作用的影响  78-79
  3 结论  79-80
  参考文献  80-81
致谢  81

相似论文

  1. 苹果多酚对γ射线引起的免疫系统损伤防护作用研究,S661.1
  2. 扩展青霉TS414脂肪酶在毕赤酵母的表达、纯化及其催化外消旋萘普生酯化拆分的研究,Q814
  3. 米曲霉FS-1脂肪酶发酵优化、分离纯化与酶学特性的研究,TQ925.6
  4. 金花茶多糖的分离纯化及化学结构的研究,S567.19
  5. 凡纳滨对虾虾头内源性蛋白酶分离纯化与酶学特性研究,S985.21
  6. 雪莲果低聚果糖提取分离及分析研究,TS255.1
  7. 海洋放线菌GY-4的鉴定及其抗菌物质研究,Q936
  8. 人源β-防御素-6的原核表达及纯化,Q78
  9. α-半乳糖苷酶高产菌株的筛选及其基因的克隆、表达、纯化和性质研究,TQ925
  10. 芝麻饼粕中木酚素的提取及抗氧化活性研究,TS229
  11. 脂肪酶催化猪油合成L-抗坏血酸脂肪酸酯,TS221
  12. 嗜酸乳杆菌NX2-6抑菌物质的分离与结构鉴定,TS201.3
  13. 脂肪酶催化猪油合成Vc脂肪酸酯及其抗氧化活性的研究,TS202.3
  14. 洋葱假单胞菌S31脂肪酶的分离提取及其在食品中应用,TS201.25
  15. 海蓬子脂溶性成分的分离及抗氧化活性的研究,R284.1
  16. 麦胚抗菌肽富集与分离纯化技术研究,TQ936.16
  17. 枯草芽孢杆菌fmbJ抗菌物质分离纯化及结构鉴定,TQ920.6
  18. 竹虫（Omphis fuscidentalis）体内纤维素酶系的酶学性质及分离纯化的初步研究,Q814
  19. 红曲色素的制备、分离及黄色素结构表征,TS264.4
  20. 鹅血中超氧化物歧化酶的提取与性质研究,TS254.9
  21. 花生红衣中红色素、原花色素的提取及分离纯化的研究,TS202.3

中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产基础科学 > 水产生物学 > 水产动物学
© 2012 www.xueweilunwen.com