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溶癌腺病毒SG511联合顺铂抗肿瘤体外实验研究

作　者: 王莹
导　师: 钱文斌
学　校: 浙江大学
专　业: 内科血液学
关键词: 腺病毒SG511 顺铂协同作用凋亡
分类号: R73-3
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
下　载: 35次
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内容摘要

背景与目的恶性肿瘤是威胁人类健康最严重的疾病之一,恶性肿瘤的传统治疗方法主要有手术切除、化疗、放疗。随着分子生物学、病毒学研究的进步,肿瘤的病毒基因疗法成为近年来研究非常热门的一种肿瘤的生物治疗方法。化疗、基因治疗和病毒治疗结合杀伤肿瘤细胞目前在实体瘤中也已有报道,并取得了较好的研究结果,为提高肿瘤的治疗效果开辟了新的路径。新型溶瘤腺病毒SG511以5型腺病毒为骨架,其病毒纤毛(fiber)由11型病毒的shaft、knob和5型的tail构成。SG511是E1855KD区缺失的嵌合型溶瘤病毒,此病毒克服了以前需要依赖肿瘤细胞表面CAR高表达的局限性,特异性的针对P53缺失或者突变的肿瘤细胞,而对正常细胞没有影响。病毒在肿瘤细胞内复制、增殖,导致肿瘤细胞溶解;并且激活凋亡通路,引起肿瘤细胞死亡,释放子代病毒继续感染周围的细胞,而达到杀灭所有肿瘤细胞的目的。顺铂是一种临床应用多年的化疗药物,至今仍是许多种肿瘤治疗的有效药物。顺铂是铂的金属络合物,作用似烷化剂,主要作用靶点为DNA,干扰DNA复制,属周期非特异性药。根据两者作用路径不同,我们将SG511与化疗药物顺铂联合,期望能增强对肿瘤细胞的杀伤。本实验旨在研究SG511与化疗药物顺铂联合作用及其机制,为将来的临床应用提供理论依据。方法构建新型溶癌腺病毒SG511、SG511-增强绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescence protein,EGFP);利用携带表达绿色荧光蛋白的腺病毒载体SG511-EGFP(enhance Green fluorescent protein)体外感染肿瘤细胞株Hela和HT29,荧光显微镜观察感染效果;利用流式细胞术定量检测GFP在SG511-EGFP感染后的不同肿瘤细胞中的表达量;应用MTT法及结晶紫染色法,检测SG511与顺铂对肿瘤细胞株增殖的影响,并通过Chou-Talalay联合指数法进行分析;通过罗丹明123(rhodamine 123,Rh123)染色法来检测SG511与顺铂感染肿瘤细胞株后线粒体膜电位的改变;应用DAPI染色法,荧光显微镜下观察SG511与顺铂感染肿瘤细胞株后细胞核形态;western blot法来检测SG511与顺铂作用实体肿瘤细胞株后Caspase家族蛋白和Bcl-2家族蛋白的改变;采用MTT比色法及结晶紫染色法检测SG511与顺铂对人正常肝细胞L02的细胞毒作用。结果1、SG511-EGFP在体外能有效转染肿瘤细胞,随着感染复数的增高荧光强度相应增强,呈剂量依赖性。2、SG511与顺铂均能抑制肿瘤细胞的生长,联合应用时表现出协同效应。3、SG511与顺铂联合加剧了细胞核碎裂程度。4、SG511能有效激活caspase9、3、8及PARP,与顺铂联用时激活程度增强。5、SG511与顺铂联用可进一步诱导细胞株Hela及HT-29 Bcl-2、Mcl-1、Bid表达下调;Bim表达上调。6、SG511联合顺铂对正常肝细胞的杀伤效应较小,具有靶向性。结论1、SG511能在体外成功感染实体肿瘤细胞株Hela、HT-29,并具有较高的感染效率。2、SG511与顺铂能协同杀伤肿瘤细胞,并增强肿瘤细胞凋亡。3、SG511具有肿瘤特异性复制能力,与顺铂联用对正常细胞无联合杀伤效应。

全文目录

致谢  4-5
中文摘要  5-7
英文摘要  7-10
缩略词  10-12
正文  12-47
  前言  12-15
  1 材料和方法  15-27
  2 结果  27-39
  3 讨论  39-42
  4 小结  42-43
  参考文献  43-47
综述  47-56
作者简历  56

溶癌腺病毒SG511联合顺铂抗肿瘤体外实验研究

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