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极性蛋白Scrib在原肠胚发生中作用研究

作　者: 徐涛
导　师: 王丽京；杨雪松；耿建国
学　校: 广东药学院
专　业: 病原生物学
关键词: Scrib numb 原肠胚过表达神经管 EMT
分类号: R321
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

在胚胎发生过程中,从原肠期开始出现器官的发生和分化,神经管、体节、心脏、脑、原肠、血管等都是在这个阶段产生的,而这一切的开端始于囊胚期上胚层的细胞向中线运动形成原条产生中胚层(也叫EMT)。卵子及随后的发育过程中,在受精卵内众多因子参与到原条的细胞运动及后续器官发育中,而表达在上皮类细胞中的极性蛋白基因是重要的调控一族。果蝇中极性蛋白Scrib的缺失使得果蝇上皮细胞的极性缺失,细胞过度增殖;在人类中Scrib中作为肿瘤抑制基因发挥作用;同时Scrib也在神经发育中对神经突触的功能的维持、内耳的发育也起到重要的作用。在我们前期的研究中在体外已经证实了Scrib可以和Numb结合负调控Notch信号。这条信号通路在体内是否有功能及有何功能,还没有得到证实。本课题以鸡胚作为动物模型研究体内情况下Scrib和Numb的异常表达对胚胎发育产生的影响及如何产生这种影响。我们通过原位杂交的方法分别检测了Scrib、Numb的表达,探索两种基因在原肠期的表达规律,发现Scrib表达开始于HH 4并在原条前端表达,表达集中,当到达HH 7时则呈弥散性表达;Numb的表达在早期和Scrib相同,但后期主要表达在神经系统中。通过电转染的方法分别过表达Scrib和Numb,发现过表达引起胚胎发育异常,过表达早期使得胚胎细胞迁移受阻,上胚层的细胞对中胚层的转变受到抑制;后期过表达引起神经管闭合缓慢,起到延缓发育的作用。我们用shRNA降调Scrib的表达发现了相反的现象,降调后促进神经管的发育。同时也检测与神经管发育有关的基因Pax-7、Islet-1等等,发现Pax-7表达不受影响,但Islet-1表达受到抑制。综上所述,我们的结果发现Numb和Scrib的过表达和降调对EMT的转变和神经管的发育具有相关性,这对于我们进一步探索Scrib和Numb结合信号的功能及下游分子机制打下牢固的基础。结论:Scrib和numb在原肠期鸡胚发育中起到重要作用,过表达Scrib和Numb抑制EMT的转变和神经管的发育;降调Scrib则促进神经管的发育。

全文目录

中文摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-21
材料与方法  21-26
  主要试剂  21
  鸡胚体外培养培养基  21
  免疫荧光及免疫荧光相关试剂  21-22
  原位杂交相关试剂  22-24
  其他相关试剂  24-25
  主要仪器  25-26
实验方法  26-38
  鸡胚模型建立  26-27
  载体构建  27-32
  探针制备  32-34
  免疫组化  34-35
  免疫荧光  35
  原位杂交  35-36
  电转染  36
  冰冻切片  36-38
实验结果  38-48
  Scrib 在原肠期鸡胚表达中的研究  38-41
  Numb 在原肠期鸡胚的表达规律  41-42
  Scrib 和 Numb 对神经管发育的影响  42-46
  Scrib 对细胞迁移的影响  46-48
讨论  48-50
参考文献  50-58
全文小结  58-59
攻读学位期间发表的论文  59-60
缩略语词表  60-61
致谢  61-62

极性蛋白Scrib在原肠胚发生中作用研究

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