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核转录因子Snail调控二氧化硅诱导的人支气管上皮细胞上皮—间质转型作用机制的研究

作　者: 李飞凤
导　师: 周建华；胡永斌
学　校: 中南大学
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 二氧化硅（SiO2） Snail 人支气管上皮细胞(HBE) 上皮-间质转型(EMT)
分类号: R329
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：研究核转录因子Snail在二氧化硅(SiO2)·诱导的人支气管上皮细胞(HBE)上皮-间质转型(EMT)中的作用机制。方法：以200μg/mlSiO2刺激的HBE细胞为模型,(1)不同时间点(0、1、6、12、18、24h)用倒置显微镜观察HBE细胞形态学改变；(2)不同时间点(0、24h)用电子显微镜观察HBE细胞超微结构改变；(3)不同时间点(0、1、6、12、18、24h)用Western-Blot检测HBE细胞Snail总蛋白表达水平的变化；(4)不同时间点(0、1、6、12、18、24h)用Western-Blot检测HBE细胞Snail核蛋白表达水平的变化；(5)不同时间点(0、1、6、12、18、24h)用免疫细胞荧光检测HBE细胞Snail的核定位情况；(6)不同时间点(0、12、18h)用EMSA检测HBE细胞Snail DNA结合活性的变化情况；(7)RNA干扰Snail的表达后,Western-Blot检测HBE细胞Snail、α-SMA、Vimentin、E-cad蛋白表达水平的变化。结果：(1)倒置显微镜观察结果显示：HBE细胞与SiO2共育后,随着时间的延长,原呈铺路石样排列的HBE细胞出现梭形、纺锤形改变,间隙略微增宽。(2)电镜结果显示：对照组的细胞大多为圆形,表面微绒毛丰富；SiO2诱导HBE细胞24h时梭形多见,细胞核多形性,细胞表面微绒毛结构减少甚至缺失,代之表现为突起,胞浆内出现大量管状结构,次级溶酶体内可见细胞吞噬的SiO2颗粒。(3)Western-blot检测总蛋白的结果显示：在SiO2作用下,Snail表达随着时间的延长逐渐上调,18h表达达到顶峰,之后逐渐下降；12h组和18h组Snail蛋白的表达水平分别为(2.88±0.63)和(4.51±1.15),与对照组的(0.57±0.04)相比,差异均有统计学意义(P＜0.05)。(4) Western-blot检测核蛋白的结果显示：在SiO2作用下,Snail表达随着时间的延长逐渐上调,12h表达达到顶峰,之后逐渐下降；12h组和18h组Snail蛋白的表达水平分别为(4.51±0.81)和(2.76±0.77),与对照组的(0.67±0.15)相比,差异均有统计学意义(P＜0.05)。(5)免疫细胞荧光结果显示：对照组可见到微弱荧光表达于胞浆,核内未见表达；实验组荧光主要表达于细胞核,随着SiO2作用时间的延长,Snail表达逐渐向核内移位。(6)EMSA结果显示：在SiO2作用下,12h组和18h组Snail DNA结合活性的表达水平分别为(0.020±0.00047)和(0.023±0.0011),与对照组的(0.0014±0.00026)相比,差异均有统计学意义(P＜0.05),表明Snail DNA结合活性明显升高。(7)siRNA结果显示：①刺激组和干扰组Snail蛋白的表达水平分别为(20.02±1.44)和(6.73±1.03),差异有统计学意义(P＜0.05),表明siRNA干扰后Snail表达下调,抑制率为66.38%；②刺激组和干扰组E-cad蛋白的表达水平分别为(0.18±0.03)和(0.84±0.01),差异有统计学意义(P＜0.05),表明siRNA干扰后E-cad表达上调；③刺激组和干扰组α-SMA和vimentin蛋白的表达水平分别为(2.35±0.45)和(0.23±0.05),(13.12±1.09)和(2.33±0.54),差异均有统计学意义(P＜0.05),表明siRNA干扰后α-SMA和vimentin表达下调,抑制率分别为90.21%和82.24%。结论：(1)SiO2可诱导人支气管上皮细胞(HBE)发生上皮-间质转型(EMT); (2) SiO2可诱导HBE细胞Snail的表达和活化；(3)Snail参与调节SiO2诱导的上皮-间质转型(EMT)。

全文目录


摘要  5-7
ABSTRACT  7-10
中英文缩略对照  10-11
第一章 前言  11-13
第二章 材料与方法结果  13-23
  2.1 实验材料  13-16
  2.2. 主要实验方法  16-23
第三章 实验结果  23-36
  3.1 SiO_2对HBE细胞形态改变的影响  23
  3.2 SiO_2对HBE细胞超微结构改变的影响  23-24
  3.3 SiO_2对HBE细胞SnaiⅠ蛋白表达水平的影响  24-26
  3.4 SiO_2对HBE细胞SnaiⅠ核定位的影响  26-27
  3.5 SiO_2对HBE细胞SnaiⅠDNA结合活性的影响  27-29
  3.6 Si RNA对SiO_2诱导HBE细胞EMT的影响  29-36
第四章 讨论  36-42
  4.1 EMT现象与器官组织的纤维化疾病  36-37
  4.2 SnaiⅠ家族的生理病理作用  37-39
  4.3 核转录因子SnaiⅠ介导SiO_2刺激HBE细胞的EMT  39-42
第五章 结论  42-43
参考文献  43-51
综述  51-58
  参考文献  54-58
致谢  58-59
攻读学位期间的主要研究成果  59

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中图分类: > 医药、卫生 > 基础医学 > 人体形态学 > 人体组织学
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