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黄精多糖对实验性糖尿病动物的保护作用及其机理研究

作　者: 公惠玲
导　师: 李卫平；尹艳艳
学　校: 安徽医科大学
专　业: 药理学
关键词: 糖尿病 黄精多糖 凋亡 一氧化氮合酶 Caspase-3 iNOSmRNA
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


目的:探讨黄精多糖(Polygona-polysaccharose,PSP)对实验性糖尿病模型动物的保护作用及其可能的作用机制。方法:1.在预实验未能测出LD50的基础上,采用最大耐受量的实验方法,观察PSP对小鼠的急性毒性作用。2.采用四氧嘧啶(Alloxan,ALX)腹腔一次注射法(220 mg/kg)建立糖尿病小鼠模型;将成功模型随机分为模型组、二甲双胍(DMBG,250mg/kg)和PSP (250、500、1 000 mg/kg)组,与对照组一起连续ig给药14d;末次给药24h后,用葡萄糖氧化酶法测定各组小鼠的空腹血糖(FBG);称胸腺、肝脏、脾脏和肾脏的重量,计算脏器指数;采用化学比色法分别检测血清和肝脏中的T-SOD、GSH-Px活性及MDA含量变化;常规HE染色法观察胰腺病理学组织学变化。3.采用链脲菌素(Streptozotocin,STZ)腹腔一次注射法(60 mg/kg)建立糖尿病大鼠模型;将成功模型随机分为模型组、二甲双胍(DMBG,233mg/kg)和PSP (195、390、780 mg/kg)组,与对照组一起连续ig给药28d;造模后第30d测定大鼠体重、进食量、进水量和尿量;末次给药24h后,腹主动脉取血,分离血清待用;采用葡萄糖氧化酶法测定FBG、采用放射免疫法检测血清胰岛素(INS)水平、采用化学比色法测定糖化血清蛋白(GSP)、甘油三脂(TG)、总胆固醇(TC)和高密度脂蛋白(HDL)含量变化。4.采用常规HE染色法观察STZ糖尿病大鼠胰腺组织的胰岛结构;采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(Terminal -deoxynucleotidyltransferase mediated nick end labeling,TUNEL)检测STZ糖尿病大鼠胰岛凋亡细胞情况;采用免疫组化染色法观察STZ糖尿病大鼠胰岛中INS和Caspase-3蛋白表达情况;采用硝酸还原酶法检测血清一氧化氮(NO)含量;采用逆转录-聚合酶链反应法(Reverse transcription- Polymerase chain reaction, RT-PCR)检测大鼠胰腺组织诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达水平。结果:1急性毒性实验PSP的最大耐受量为31.25 g/kg,提示PSP治疗剂量几乎无毒副作用。2 PSP对ALX糖尿病小鼠的保护作用2.1 PSP能明显降低糖尿病小鼠血糖,显著提高糖尿病小鼠的胸腺指数、脾脏指数和肝脏指数。2.2 PSP明显提高ALX糖尿病小鼠血清和肝脏中降低的T-SOD和GSH-Px活性,降低血清和肝脏中升高的MDA含量,提示PSP可能一定程度上改善ALX糖尿病小鼠血清和肝脏的抗氧化能力。2.3常规HE染色结果显示模型组小鼠胰腺几乎找不到完整的胰岛,胰岛结构破坏严重,各用药组小鼠胰岛形态相对清晰,边界清楚,胰岛细胞排列整齐,说明PSP对STZ糖尿病小鼠胰腺的损伤有一定的保护作用。3 PSP对STZ糖尿病大鼠的保护作用3.1 PSP各剂量组大鼠“三多一少”的症状得到了显著的改善,PSP (195、390、780 mg/kg)组和盐酸二甲双胍(Metformin Hydrochloride Tablets,DMBG)组FBG、GSP含量显著降低,血清INS水平升高,胰岛中INS阳性表达率升高。3.2模型组TG及TC含量显著升高,HDL含量降低;PSP(390、780 mg/kg)组和DMBG组TG及TC含量有明显降低,同时HDL有一定程度的升高。3.3 PSP组和DMBG组血清NO含量显著性降低;免疫组化结果显示,模型组胰岛中Caspase-3表达率明显升高,PSP组胰岛中Caspase-3表达率降低;TUNEL法检测结果显示,模型中胰岛细胞凋亡率明显提高,PSP组胰岛细胞凋亡率下降。3.4 RT-PCR结果显示,正常对照组胰腺iNOS mRNA的几乎不表达或表达量很少,模型组胰腺iNOS mRNA表达量显著升高,PSP (390、780 mg/kg )组和DMBG组不同程度的下调胰腺iNOS mRNA的表达。结论:1. PSP对ALX糖尿病小鼠有一定的保护作用,其机制可能与其提高ALX糖尿病小鼠血清和肝脏的抗氧化能力有关。2. PSP能够降低STZ糖尿病大鼠升高的血糖,调节脂代谢,对STZ糖尿病大鼠具有一定的保护作用,其机制可能与其抑制胰岛细胞凋亡,下调Caspase-3和iNOSmRNA表达有关。

全文目录


一、英文缩略词表  6-8
二、中文摘要  8-11
三、英文摘要  11-14
四、正文  14-52
  1 前言  14-15
  2 实验材料  15-18
    2.1 实验动物  15-16
    2.2 药品与试剂  16-17
    2.3 实验仪器  17-18
  3 实验方法  18-26
    3.1 PSP 急性毒性实验  18
    3.2 PSP对ALX糖尿病小鼠的保护作用  18-20
      3.2.1 动物模型的建立与分组给药  18
      3.2.2 一般情况观察  18-19
      3.2.3 血清FBG 的测定  19
      3.2.4 胸腺、脾脏、肝脏、肾脏指数的测定  19
      3.2.5 血清T-SOD、GSH-Px 活性和MDA 含量的测定  19
      3.2.6 肝脏T-SOD、GSH-Px活性和MDA含量的测定  19
      3.2.7 胰腺病理组织学观察  19-20
    3.3 PSP对STZ糖尿病大鼠的保护作用  20-26
      3.3.1 动物模型的制作及分组给药  20
      3.3.2 体重、进食量、进水量和尿量的测定  20
      3.3.3 FBG、GSP、INS和NO的测定  20
      3.3.4 血清TG、TC 和HDL 的测定  20
      3.3.5 胰腺病理组织学观察  20-21
      3.3.6 免疫组化染色法检测胰腺INS 表达  21-22
      3.3.7 免疫组化法检测胰腺Caspase-3 蛋白的表达  22
      3.3.8 TUNEL法检测STZ糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡  22-23
      3.3.9 逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胰腺iNOSmRNA 表达  23-26
    3.4 统计方法  26
  4 实验结果  26-45
    4.1 PSP 急性毒性实验  26-27
    4.2 PSP 对ALX 糖尿病小鼠的保护作用  27-32
      4.2.1 一般情况观察  27
      4.2.2 PSP对ALX糖尿病小鼠FBG的影响  27-28
      4.2.3 PSP 对ALX 糖尿病小鼠脏器指数的影响  28-29
      4.2.4 PSP 对ALX 糖尿病小鼠血清抗氧化能力的影响  29-30
      4.2.5 PSP 对ALX 糖尿病小鼠肝脏抗氧化能力的影响  30
      4.2.6 PSP 对 ALX 糖尿病小鼠胰腺 HE 染色的影响  30-32
    4.3 PSP 对 STZ 糖尿病大鼠的保护作用  32-45
      4.3.1 PSP 对 STZ 糖尿病大鼠进食量、进水量、尿量与体重的影响  32-33
      4.3.2 PSP对STZ糖尿病大鼠FBG、GSP和INS的影响  33-35
      4.3.3 PSP对STZ糖尿病大鼠血脂的影响  35-36
      4.3.4 PSP对STZ糖尿病大鼠胰腺病理组织学的影响  36
      4.3.5 PSP 对糖尿病大鼠 INS 阳性表达率的影响  36-39
      4.3.6 PSP 对 STZ 糖尿病大鼠胰腺 Caspase-3 表达的影响  39-41
      4.3.7 PSP对STZ糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡的影响  41-43
      4.3.8 PSP 对STZ 糖尿病大鼠血清NO 的影响  43
      4.3.9 PSP 对 STZ 糖尿病大鼠胰腺 iNOS mRNA 表达的影响  43-45
  5 讨论  45-51
    5.1 黄精及黄精多糖  45-46
    5.2 动物模型的评价  46-47
    5.3 PSP对糖尿病鼠的作用及机制研究  47-51
  6 结论  51-52
五、参考文献  52-56
六、附录  56-57
七、致谢  57-58
八、综述  58-70
  参考文献  68-70

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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