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金纳多和萝卜硫素对小鼠视网膜神经细胞凋亡的保护作用与机制研究

作　者: 杨阳
导　师: 孔力
学　校: 大连医科大学
专　业: 人体解剖与组织胚胎学
关键词: 金纳多萝卜硫素视网膜光损伤凋亡
分类号: R774.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的：光照可引起视网膜细胞凋亡,致视网膜外核层损伤。本实验通过对视网膜光损伤小鼠进行金纳多(GBE)和萝卜硫素(SF)心腔注射,探讨GBE和SF对光照引起的视网膜细胞凋亡是否具有预防保护作用及其机制。方法：1.建立小鼠光损伤模型：Bal b/c小鼠暗室饲养24小时,次日置于光照箱内,分别于照射24h、48h和72h处死,取眼球制作石蜡切片。HE染色进行视网膜形态学观察；进行外核层厚度测量和外核层层数统计,分析不同光照长度对视细胞造成的损伤;DNA梯度电泳及TUNEL法检测视细胞凋亡。2. Bal b/c小鼠随机分为6组即正常对照组,实验对照组(生理盐水),GBE组(GBE-Ⅰ组100 ul/二次；GBE-Ⅱ组为50μl/一次,浓度为3.5mg/ml),SF组(SF-Ⅰ组为60μl/二次；SF-Ⅱ组为30μl/一次,浓度为50mg/ml),每组5只,心脏注射给药(替代静脉注射),除正常对照组之外的5组小鼠均在自制光照箱内光照72h后断颈处死,常规制备眼球石蜡切片,HE染色后形态学观察并测量外核层厚度;RT-PCR检测细胞色素C和Bak-1的表达；Caspase活性试剂盒检测Caspase-3活性。使用SPSS13.0统计软件,单因素方差分析法进行分析。结果：1.小鼠光损伤模型建立：HE染色形态学观察发现正常组小鼠视网膜结构层次清楚；光照各组外核层明显变薄,视网膜视细胞内、外节排列明显紊乱,分界不清,出现不规则细胞核。凋亡检测及定位：DNA电泳结果显示,光照各组均出现DNA梯状条带,其中光照72h组DNA梯状条带最为显著；TUNEL法检测显示细胞凋亡位于外核层。2.GBE和SF对视网膜光损伤的预防保护作用：形态学观察发现,实验对照组视网膜细胞排列稀疏,内、外节排列明紊乱、肿胀、破碎,外核层明显变薄；给药组及正常对照组的视网膜结构均优于实验对照组。外核层厚度测量结果,正常对照组49.23±2.32μm,实验对照组40.36±2.17μm; GBE-Ⅰ组、GBE-Ⅱ组外核层厚度分别为42.0770±0.8999μm和40.9411±0.706μm; SF-Ⅰ组、SF-Ⅱ组外核层厚度分别为48.2352±2.0447μm和46.8004±0.6014μm。对结果进行统计学分析表明,GBE-Ⅰ组、GBE-Ⅱ组、SF-Ⅰ组、SF-Ⅱ组与实验对照组比较均有显著差异(P<0.001)。3.GBE和SF对视网膜光损伤的预防保护机制：GBE-Ⅰ组、GBE-Ⅱ组、SF-Ⅰ组、SF-Ⅱ组与实验对照组比较,RT-PCR检测结果显示细胞色素C和Bak-1的表达均不同程度下调。GBE-Ⅰ组、GBE-Ⅱ组、SF-Ⅰ组、SF-Ⅱ组mRNA水平表达与对照组比较有显著性差异(P<0.01,P<0.05); Caspase-3活性检测结果：GBE-Ⅰ组、GBE-Ⅱ组、SF-Ⅰ组、SF-Ⅱ组与实验对照组比较,Caspase-3活性均降低。结论：1.可以采用定时光照建立小鼠视网膜光损伤模型；2.GBE和SF对视网膜光损伤具有预防保护作用。3.GBE和SF对视网膜光损伤的预防保护机制均与抑制视网膜细胞凋亡及相关蛋白表达下调有关。

全文目录

摘要  5-7
Abstract  7-9
前言  9-10
材料和方法  10-16
结果  16-22
讨论  22-25
结论  25-26
参考文献  26-28
综述  28-34
  参考文献  32-34
致谢  34-35

金纳多和萝卜硫素对小鼠视网膜神经细胞凋亡的保护作用与机制研究

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