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藤黄酸对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其对STAT3基因表达的调控作用

作　者: 刘鑫鑫
导　师: 王衍富
学　校: 大连医科大学
专　业: 老年医学
关键词: 藤黄酸肺肿瘤 STAT3 增殖凋亡
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:本文旨在研究藤黄酸对人肺腺癌A549细胞增殖与凋亡的影响,并探讨其是否对STAT3存在调控作用,为藤黄酸临床用于肺腺癌的治疗提供理论依据。方法:以不同浓度梯度的藤黄酸处理肺腺癌A549细胞,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性,采用流式细胞仪观察藤黄酸对细胞的凋亡的影响。在相差倒置显微镜下观察细胞形态学变化。免疫荧光验证STAT3蛋白在A549细胞中的分布情况及蛋白量表达变化,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法检测不同浓度藤黄酸对A549细胞中STAT3mRNA和蛋白表达的影响。结果:藤黄酸(GA)可显著抑制肺腺癌A549细胞的生长,抑制率与药物浓度和作用时间成正相关,24h的IC50为(2.81±0.28)umol/L,当GA浓度达8umol/L时,对A549的抑制率接近80%,48、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为(1.86±0.01)umol/L及(1.35±0.10)umol/L。流式细胞仪进一步证实GA可诱导A549细胞凋亡:1.5umol/L及3 umol/L GA干预A549细胞24h后,凋亡率分别为(24.38±1.42)%、(51.60±3.23)%。当GA的浓度达6umol/L时,A549的凋亡率达(77.09±1.44)%。加药前,细胞贴壁好,可见核及核仁,呈扁平多角形,随着药物浓度的增加,细胞出现了典型的凋亡形态改变,贴壁不佳,染色质浓缩,核膜破裂,细胞逐渐皱缩成团,突起消失,并可见凋亡小体。在荧光显微镜下,空白对照组中的细胞形态饱满,STAT3蛋白主要分布在细胞的胞浆中;经DAPI核染后活细胞可发出明亮蓝色荧光。3umol/L藤黄酸处理组中,活细胞明显减少,其蛋白的荧光强度亦明显减弱。STAT3基因在肺腺癌A549中呈现高表达,不同浓度的GA作用后,STAT3的mRNA及蛋白表达水平均成浓度依赖性下降,且p<0.05,均有统计学意义。结论:藤黄酸能明显抑制人肺腺癌细胞A549的增殖,并诱导其凋亡,其机制可能与抑制STAT3表达有关。

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一、摘要 6-9 （一）中文摘要 6-7 （二）英文摘要 7-9二、正文 9-27 （一）前言 9-10 （二）材料与方法 10-15 （三）结果 15-19 （四）讨论 19-23 （五）结论 23-24 （六）参考文献 24-27三、文献综述 27-35 （一）正文 27-32 （二）参考文献 32-35四、附录 35-36五、致谢 36

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