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抗人B7-2单链抗体基因的构建及表达研究

作　者: 董海辉
导　师: 朱江
学　校: 苏州大学
专　业: 遗传学
关键词: B7-2 单链抗体复性原核表达
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 28次
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内容摘要

鼠源性单抗在人体使用后可产生人抗鼠抗体(Human Anti-Mouse Antibody, HAMA)反应,而且分子量大,不能有效进入病灶部位,临床使用受到限制。单链抗体(single chain antibody, ScFv)是由一条连接肽将IgG分子重链和轻链的可变区连接而成,减少了免疫原性,分子小,实体组织穿透力强,血浆半衰期短,因而在临床疾病的诊断和治疗中具有重要的应用价值。在成功建立稳定分泌鼠抗人B7-2杂交瘤细胞株基础上,扩增并克隆出该单克隆抗体的重链(VH)和轻链(VL)可变区基因。通过重叠延伸PCR(SOE-PCR)方法,在VH和VL可变区基因之间引入连接肽(Gly4Ser)3,体外构建抗人B7-2单链抗体(B7-2 ScFv)基因。为便于表达产物的纯化,在抗人B7-2 ScFv的C端增加了6×His tag序列。将其克隆至表达载体pET32a并在大肠杆菌中进行原核表达。SDS-PAGE和Western-blot分析结果表明,抗人B7-2 ScFv在BL21(DE3)中获得高效表达,表达量占菌体总蛋白30%以上,表达产物以不溶性包涵体形式存在。经过溶解包涵体,体外复性过程和镍柱亲和层析,纯化了抗人B7-2 ScFv。本研究在国内首次获得了高纯度的抗人B7-2 ScFv,为今后抗人B7-2ScFv的活性和功能研究以及抗肿瘤药物的开发奠定了基础。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-6
引言  6-7
第一部分文献综述  7-28
  第一章 B7 分子研究进展  7-28
    1 单链抗体的研究进展  7-14
    2 B7 家族的研究进展  14-19
    3 B7 与肿瘤基因治疗  19-22
    4 展望  22
    参考文献  22-28
第二部分研究内容  28-46
  第二章抗人 B7-2 单链抗体基因 pET32a B7-2-ScFv 融合表达载体的构建  28-39
    1 材料和方法  29-33
    2 结果与分析  33-36
    3 讨论  36
    参考文献  36-39
  第三章抗B7-2ScFv 的诱导表达、鉴定和纯化  39-46
    1 材料和方法  39-42
    2 结果与分析  42-44
    3 讨论  44-45
    参考文献  45-46
结论  46-47
在读期间公开发表的研究论文  47-48
致谢  48

抗人B7-2单链抗体基因的构建及表达研究

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