学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

过氧化氢及白介素1β对体外培养兔关节软骨细胞影响的机理研究

作　者: 贺牡丹
导　师: 王小平
学　校: 暨南大学
专　业: 麻醉学
关键词: 骨关节炎软骨细胞活性氧过氧化氢凋亡线粒体膜电位白介素-1β 激光共聚焦显微镜
分类号: R965
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 68次
引　用: 0次
阅　读: 论文下载

内容摘要

研究背景骨关节炎(osteoarthritis, OA)是一种退行性病变,表现为局限性、进行性关节软骨破坏及关节边缘骨赘形成,并伴有不同程度的滑膜炎症,其临床表现为关节肿胀、疼痛、畸形、功能障碍甚至残疾。软骨细胞是成熟关节软骨中唯一的细胞类型,它负责细胞外基质的合成和更新,并维持基质的完整,软骨细胞和软骨基质的改变在OA的发病过程中扮演着重要的角色。目前OA的发病机制尚不明确,但越来越多的研究发现活性氧(reactive oxygen species, ROS)和细胞因子起着很重要的作用。研究目的为了深入了解活性氧和细胞因子在软骨损伤过程中的作用机制,为今后医学研究中寻找治疗骨关节病的新药及治疗方法提供理论基础,本实验通过体外单层培养新西兰兔关节软骨细胞,研究活性氧和白介素-1β(IL-1β)诱导兔关节软骨细胞凋亡的作用机制。研究方法1.采用机械分离和化学消化法从6周龄新西兰兔关节软骨组织中分离出正常的软骨细胞进行原代培养,并用甲苯胺蓝染色鉴定软骨细胞。2.分别用不同浓度的过氧化氢(H2O2)作用软骨细胞,采用CCK8方法检测细胞活力,观察不同浓度、不同时间点H2O2对软骨细胞活力的影响,并选取合适的对软骨细胞活力降低影响明显的H2O2浓度(1.5mM)和时间作为后续的实验研究。3.给予1.5mMH2O2以及1.5mMH2O2合用环孢菌素(CsA), caspase3、8、9抑制剂作用于软骨细胞,然后用CCK-8的方法检测它们对H2O2降低软骨细胞活力有无抑制作用。4.用FITC-AnnexinV/PI双染的方法在流式细胞仪(FCM)上检测H2O2诱导软骨细胞凋亡率以及NAC对此有无抑制效应。5.采用流式细胞仪检测H2O2处理软骨细胞后其线粒体膜电位(ΔΨm)的变化并用激光共聚焦显微镜动态监测单个活软骨细胞中膜电位的崩溃情况。6.分别使用不同浓度IL-1β作用软骨细胞,采用CCK8方法检测,观察不同浓度IL-1β对软骨细胞活力的影响。研究结果1.手术中取出的兔关节软骨组织,经机械分离和化学消化法单层培养出的软骨细胞,经形态学观察和甲苯胺蓝染色证实为软骨细胞。2. 1.5mM H2O2能诱导软骨细胞活力降低,并且线粒体膜稳定剂CsA和caspase3/8/9抑制剂不能抑制此效应。3. 1.5mM H2O2处理软骨细胞2h即可诱导软骨细胞爆发性凋亡,NAC在一定程度上能抑制此效应。4. H2O2能显著降低软骨细胞线粒体膜电位,用激光共聚焦显微镜动态监测单个活软骨细胞显示：线粒体膜电位在突然消失前会增高并维持20分钟左右。5. 5-100ng/ml浓度的IL-1β能诱导软骨细胞活力增加。结论1.软骨细胞单层培养法能在短时间内获取大量高纯度、形态和细胞表型稳定的软骨细胞,满足实验需要。2. H2O2通过caspase非依赖的线粒体途径诱导软骨细胞凋亡。3. IL-1β能诱导软骨细胞增殖。

过氧化氢及白介素1β对体外培养兔关节软骨细胞影响的机理研究

内容摘要

全文目录

相似论文