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超表达OsSsr1基因烟草的获得及其抗逆性分析

作　者: 封伟
导　师: 邵敏
学　校: 南京农业大学
专　业: 植物病理学
关键词: OsSsr1 转基因烟草 非生物胁迫 活性氧 耐盐性
分类号: S572
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


本实验室将Harpin蛋白编码基因hrrf1基因转入水稻获得的转基因系NJH12具有抗病、耐旱等特性。在NJH12的表达谱中,发现OsSsr1基因表达上调。本实验水稻cDNA文库中克隆到的全长2173bp的OsSsr1基因。对该基因进行序列分析,该基因功能未知。本实验将OsSsr1基因定向克隆于带有组成型表达玉米泛素启动子(Ubi)和hph基因(带有潮霉素抗性基因)的植物表达载体pVOsSsr1中,冻融法转化农杆菌LBA4404,利用叶圆盘法对烟草进行Ti质粒介导的遗传转化。用含潮霉素的培养基筛选抗性苗。分别提取转基因烟草叶片基因组DNA、RNA, PCR检测表明OsSsr1已经整合到烟草基因组中,RT-PCR和PCR-Southern杂交验证表明该基因在烟草中可以正常表达。并对T1代转基因植株进行高盐、高温、低温三种非生物胁迫研究：1)转基因烟草耐盐性：分别将14日龄烟草用0.2M NaCl和20日龄烟草用0.3MNaCl处理3d,恢复培养14d；对5周龄烟草加入0.15 M NaCl的Hoagland营养液处理,在第3、6、9、12天,测定叶片中MDA含量、脯氨酸含量和SOD、POD酶活性。结果显示,转基因幼苗明显耐盐,而野生型全部死亡。五周龄的转基因烟草MDA含量要远低于野生型植株,SOD、POD活性要明显高于野生型,转基因植株的脯氨酸的积累显著高于野生型。实验结果证明过量表达OsSsr1能够提高烟草的耐盐性。2)转基因烟草耐热性：将转基因烟草10日龄幼苗植株置于48℃下热激处理30min,28℃恢复10d；对五周龄烟草48℃热激处理3h,在第3、6、9、12天测定叶片中叶绿素含量、SOD和POD活性。结果显示：10日龄转基因幼苗在热激处理下生长良好；野生型幼苗大部分死亡,但该实验重复后不能得到相同结果。五周龄植株在热激后,SOD、POD活性和叶绿素含量高于野生型,但差异不显著。因此实验初步认为过量表达OsSsr1不能够提高烟草的耐热性。3)转基因烟草耐冷(冻)性：将10日龄烟草幼苗置于-10℃处理2.5h,28℃恢复10d；对五周龄烟草置于8℃低温处理12d,在第3、6、9、12天测定叶片中叶绿素含量、SOD和POD活性。结果显示：10日龄转基因幼苗在冻害处理后,转基因系与野生型差异不明显；五周龄植株在冷处理后,SOD、POD活性和叶绿素含量基本相同,无明显差异。实验证明过量表达OsSsr1并没有提高烟草的耐冷(冻)能力。

全文目录


摘要  5-7ABSTRACT  7-9上篇 文献综述  9-24  第一章 通过转基因方法提高植物抗逆性的研究进展  10-24    1 单一效应基因  11-15      1.1 渗透调节剂  11-13      1.2 抗氧化基因  13      1.3 热激蛋白基因  13-14      1.4 胚胎发育晚期富集蛋白(LEA)  14      1.5 转运蛋白基因  14-15      1.6 脂类合成有关的多功能基因  15    2 调节基因  15-20      2.1 调节因子  16-18      2.2 信号转导基因  18      2.3 启动子的选择  18-20      2.4 Harpin蛋白  20    3 对生物胁迫作用的评估  20-24      3.1 胁迫实验处理及评估  20-21      3.2 干旱和盐胁迫实验方案设计  21-24下篇 研究内容  24-47  第二章 超表达OsSsr1基因烟草的获得及其抗逆性分析  25-47    1 材料和方法  26-33      1.1 实验材料  26-28      1.2 实验方法  28-33    2 转基因烟草抗逆性分析  33-36      2.1 非生物胁迫前处理  33      2.2 幼苗抗逆性分析  33      2.3 五周龄植株的抗逆性分析  33-36    3 结果分析  36-45      3.1 OsSsr1基因转化烟草及鉴定  36-39      3.2 转基因植株的抗逆性分析  39-45    4 讨论  45-47参考文献  47-57附录1 实验中所用培养基配制方法  57-60附录2 全文名称及缩写词  60-61致谢  61

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中图分类: > 农业科学 > 农作物 > 经济作物 > 烟草（菸草）
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