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TcdA对K562/A02细胞增殖、凋亡和耐药性的影响

作　者: 张豪
导　师: 席亚明
学　校: 兰州大学
专　业: 血液病学
关键词: 白血病 多药耐药性 K562/A02细胞 凋亡 艰难梭菌毒素A
分类号: R733.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：研究艰难梭菌毒素A (Ted A)对多药耐药的人白血病细胞株K562/A02增殖、凋亡及耐药性的影响,并探讨其作用机制。方法：MTT法检测Ted A对细胞增殖及耐药性的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡,Western blot方法检测P-gp蛋白表达水平的变化,比色法检测caspase-3活性。结果：Ted A对K562/A02细胞有明显的增殖抑制作用,50ng/ml、100ng/ml、200 ng/ml、400 ng/ml和800 ng/ml的Ted A处理24小时后抑制率分别为(8.76±0.76)%、(28.55±0.43)%、(47.89±0.27)%、(58.08±0.06)%和(57.70±0.79)%,且呈时间和浓度依赖性；Tcd A作用后,G0/G1期K562/A02细胞比例增加,S期细胞减少,且出现明显的凋亡峰,200ng/ml和400ng/ml浓度组的凋亡率分别为14.05%和22.89%；K562/A02细胞除对阿霉素(ADM)耐药外,对柔红霉素(DNR)和阿糖胞苷(Ara-C)的耐药倍数也达21.91和7.46,但是对ADM耐药最强,耐药倍数高达87.06,非毒性剂量(50ng/ml)的Tcd A与各药联合应用后,均能显著抑制K562/A02细胞增殖,而且能明显降低上述药物的IC50,对ADM、DNR和Ara-C的逆转倍数分别为3.09、2.89和2.79；非细胞毒性剂量的Ted A作用后K562/A02细胞的P-gp蛋白表达水平下降,而caspase-3活性则呈时间和剂量依赖性增强。结论：Ted A可以通过诱导凋亡来抑制K562/A02细胞增殖,并能部分逆转细胞的多药耐药性,机制可能与下调P-gp蛋白表达并激活caspase-3有关。

全文目录


摘要  4-5
Abstract  5-8
前言  8-11
材料与方法  11-17
  一 实验材料  11-13
    1 研究对象  11
    2 实验仪器  11-12
    3 实验试剂  12
    4 主要溶液配制  12-13
  二 实验方法  13-17
    1. TcdA的提取及纯化  13
    2. MTT法观察TcdA对K562/A02细胞增殖的影响  13
    3. FCM检测TcdA对K562/A02细胞周期的影响  13-14
    4. 细胞耐药性检测及耐药逆转实验  14
    5. Western blot检测耐药蛋白P-gp的表达  14-16
    6. caspase-3活性检测  16
    7. 统计学分析  16-17
结果  17-22
  1. TcdA对K562/A02细胞增殖的影响  17
  2. TcdA对K562/A02细胞细胞周期的影响  17-19
  3. 细胞耐药性检测及TcdA联合化疗药物的药效评价  19-20
  4. Tcd A对K562/A02细胞P-gp表达的影响  20
  5. TcdA作用对K562/A02细胞caspase-3活性的影响  20-22
讨论  22-25
结论  25-26
参考文献  26-29
综述  29-38
  参考文献  35-38
致谢  38

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 造血器及淋巴系肿瘤 > 白血病
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