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Trb3基因shRNA载体的构建及对舌鳞癌细胞增殖和凋亡的影响

作　者: 文浩杰
导　师: 隋军
学　校: 昆明医学院
专　业: 耳鼻咽喉科学
关键词: 舌鳞癌 Trb3基因 shRNA 真核表达载体 增殖 凋亡
分类号: R739.86
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
下　载: 22次
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内容摘要


目的：本课题拟构建靶向人Trb3的shRNA真核表达载体及稳定表达Trb3 shRNA的舌鳞状细胞株,检测其对靶基因的沉默效果、观察其对舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法：运用分子克隆技术构建靶向人Trb3 shRNA载体pSUPER-shTrb3;逆转录病毒方法建立稳定干扰内源性Trb3基因的舌鳞癌细胞株；Western Blot、Real-timePCR技术检测靶基因Trb3的表达情况,流式细胞术检测细胞增殖及凋亡情况,Western Blot检测凋亡相关蛋白的表达。结果：酶切及测序证实成功构建了靶向人Trb3基因的shRNA真核表达载体,利用逆转录病毒方法成功建立了稳定表达Trb3 shRNA的舌鳞癌细胞株,Real-time PCR、Western Blot证实重组质粒组细胞Trb3 mRNA和蛋白表达水平相对于空载体细胞组显著下降(P<0.05)。流式细胞术证实在内质网应激条件下干扰内源性Trb3可促进舌鳞癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,同时凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3、7、cleaved-PARP表达下调。结论：内质网应激状态下,Trb3参与了舌鳞癌细胞Tca8113的凋亡调控,该细胞模型的建立为以Trb3基因为基础的头颈鳞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)靶向治疗奠定了实验基础。

全文目录


英文缩略词表  6-8
中文摘要  8-9
ABSTRACT  9-11
引言  11-14
实验材料与方法  14-32
实验结果  32-38
讨论  38-44
结论  44-45
参考文献  45-50
综述  50-55
  参考文献  53-55
攻读硕士学位期间撰写和发表论文  55-56
致谢  56

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 口腔、颌面部肿瘤 > 舌肿瘤、舌下肿瘤
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