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中药青蒿琥酯对人口腔鳞癌细胞株的抑制作用以及对肿瘤抑制基因RECK表达的影响

作　者: 李健
导　师: 龚莉
学　校: 泸州医学院
专　业: 病理学与病理生理学
关键词: 青蒿琥酯 口腔鳞癌Tca8113细胞 增殖 细胞凋亡 细胞周期 RECK
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的：研究中药青蒿琥酯(Artesunate, ART)对人口腔鳞癌Tca8113细胞体外增殖活性、细胞凋亡、细胞周期分布的影响,并检测其对肿瘤抑制基因RECK蛋白表达的调节作用,探讨其可能的作用机制,拟为中药青蒿琥酯用于临床肿瘤的治疗提供理论依据。方法：将口腔鳞癌Tca8113细胞随机分为对照组、12.5ug/ml、25ug/ml、50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml组共6组,分别培养24h、48h、72h后：(1)采用倒置显微镜观察各浓度组Tca8113细胞形态学变化；(2)采用MTT法观察各浓度组对Tca8113细胞的生长抑制作用；(3)采用流式细胞仪分析各浓度组对Tca8113细胞凋亡、细胞周期分布的影响；(4)采用免疫细胞化学法检测各浓度组对Tca8113细胞RECK蛋白表达的影响。结果：(1)对照组各时间段细胞贴壁生长良好,边界清楚,呈上皮样细胞形态,细胞核位于细胞中央；ART作用24h后,12.5ug/ml、25ug/ml、50ug/ml浓度组细胞形态无明显变化,100ug/ml、200ug/ml浓度组,部分细胞变圆,细胞皱缩,折光性强；作用48h、72h后,细胞呈现不规则形,有大量空泡出现,边缘呈毛刺状,折光性差,尤以100ug/ml、200ug/ml浓度组最为明显。(2)ART作用于Tca8113细胞后能有效地抑制其增殖活性,且随着作用时间的延长,浓度的增加,其抑制作用越明显,同一时间段各浓度组细胞抑制率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),且同一浓度组不同时间段细胞抑制率比较差异也有统计学意义(P<0.05),呈现时间、剂量依赖性,其中尤以100ug/ml、200ug/ml组,48h、72h时间段最为明显,抑制率分别为25.74%,29.34%,33.25%和45.47%。(3)ART作用于Tca8113细胞后能有效诱导其凋亡,且随着作用时间的延长,浓度的增加,其凋亡细胞越多,同一时间段各浓度组细胞凋亡率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),且同一浓度组不同时间段细胞凋亡率比较差异也有统计学意义(P<0.05),呈现时间、剂量依赖性,其中尤以100ug/ml、200ug/ml组,48h、72h时间段最为明显,凋亡率分别为(30.88±0.53)%,(37.86±0.49)%,(63.20±0.32)%和(83.43±0.44)%。(4)各浓度组ART作用于Tca8113细胞24h、48h、72h后细胞周期分布发生变化,主要表现为G0/G1期细胞比例增加,S期、G2/M细胞比例减少,同一时间段各浓度组细胞G0/G1期比率与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),其中100ug/ml、200ug/ml组最为明显,G0/G1期期比率分别为(66.92±0.53)%、(68.87±0.49)%、(67.98±0.57)%、(70.92±0.44)%、(72.95±0.68)%、(78.05±0.42)%；同一浓度组不同时间段间差异无统计学意义(P>0.05)。(5)免疫组化结果显示,ART作用24h,随着浓度的增加,RECK阳性表达细胞的平均光密度值呈逐渐增高的趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)；ART作用48h.72h, RECK蛋白阳性表达细胞的平均光密度值呈逐渐增高,各浓度组细胞平均光密度值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)；在不同时间段,12.5ug/ml、25ug/ml组RECK阳性表达细胞的平均光密度值与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)；而50ug/ml、100ug/ml、200ug/ml组随着时间的延长,RECK蛋白阳性表达逐渐增高,各组平均光密度值与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)；在高浓度组呈现出时间、剂量依赖性。结论：1、ART对人口腔鳞癌Tca8113细胞的增殖具有明显抑制作用,且呈现时间、剂量依赖性。2、ART可以诱导Tca8113细胞发生凋亡,且呈现时间、剂量依赖性。3、ART可以使Tca8113细胞被阻滞在G0/G1期,呈现剂量依赖性,但无时间依赖性。4、ART可以上调Tca8113细胞中肿瘤抑制基因RECK的表达,从而发挥其抑制肿瘤侵袭和转移的作用,且在高浓度组呈现出时间、剂量依赖性。5、ART可以抑制人口腔鳞癌Tca8113细胞的增殖活性,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,上调RECK蛋白的表达,抑制肿瘤侵袭和转移。提示中药青蒿琥酯在抗口腔鳞癌方面具有潜在的基础与临床研究价值,有望成为高效低毒的新型抗肿瘤药物以及辅助化疗药物,并可进一步为拓宽口腔鳞癌的治疗方法,提高治愈率提供帮助。

全文目录


摘要  3-6
Abstract  6-10
前言  10-13
材料与方法  13-22
结果  22-27
附图  27-32
讨论  32-39
结论  39-40
参考文献  40-44
英汉缩略词对照表  44-45
致谢  45-46
综述  46-56
  参考文献  52-56

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