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犬副流感病毒的检测和NP基因的克隆、表达及其重组蛋白的免疫学活性的研究

作　者: 刘腾飞
导　师: 简子健
学　校: 新疆农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 犬副流感病毒 RT-PCR 克隆 NP蛋白 原核表达 免疫学活性
分类号: S858.292
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


犬传染性呼吸系统疾病(Canine Infectious Respiratory Disease,CIRD)即犬窝咳,临床特征表现为发热、咳嗽、流涕,是一种多因素和多病原引起的犬的重要疾病,其中犬副流感病毒(Canine Parainfluenza Virus,CPIV)是CIRD的主要病原。犬副流感病毒属副黏病毒,是不分节段的RNA病毒,其基因全长为15246nt,主要由NP基因、P基因、M基因、F基因、HN基因、L基因组成。1967年Binn等人首次用犬肾细胞(MDCK)从具有呼吸道症状的病犬中分离得到CPIV。血清学调查表明CPIV在世界各国普遍存在,是危害犬业重要传染病之一。本研究工作主要分三个部分来进行:1.本研究首先通过建立犬副流感病毒RT-PCR检测方法,用于检测CPIV。经特异性试验、敏感性试验和重复性试验表明建立的RT-PCR方法是一种比较良好的检测CPIV的方法。采用此方法对临床收集的32份样品进行检测,阳性率为53.12%。2.克隆的犬副流感病毒NP基因全长为1658bp。首先从病犬的鼻腔分泌液中提取总RNA,然后用RT-PCR扩增得到目的基因,将其克隆到PMD18-T simple vector中,测序检验。结果表明获取的NP基因核苷酸序列与GeneBank中标准序列存在三处碱基变异,导致编码的蛋白质出现三个氨基酸的变异。3.用PCR技术以NP蛋白全基因质粒为模板扩增出NP蛋白的表达基因序列1530bp,然后将其定向插入到PGEX-6P-1中,构建其原核表达载体PGEX-6P-1-NP,并且在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达,经Wester-blot分析结果表明重组融合蛋白(GST -NP)蛋白具有一定的免疫学活性。

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 动物医学（兽医学） > 各种家畜、家禽、野生动物的疾 > 家畜 > 犬
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