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苦参碱对肝癌Hep G2细胞的抗肿瘤作用：诱导凋亡和自噬

作　者: 张军强
导　师: 李玉民
学　校: 兰州大学
专　业: 外科学
关键词: 苦参碱凋亡自噬肝癌 Bax Beclin 1
分类号: R285.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的苦参碱是从豆科槐属植物根中提取的一种生物碱,具有广泛的药理作用。本实验研究苦参碱对肝癌Hep G2细胞的抗肿瘤作用,并进一步阐明其抗肿瘤作用的分子机制。方法用MTT法检测细胞活力的变化。用流式细胞术检测苦参碱对细胞周期的影响。Annexin-V-FITC/PI双染后用流式细胞仪检测不同浓度苦参碱引起的细胞凋亡率的变化。用倒置相差显微镜观察苦参碱干预后Hep G2细胞的形态学改变,并用透射电镜进一步观察细胞的超微结构变化。同时用MDC染色后通过荧光显微镜检测苦参碱是否能诱导自噬,并用自噬的特异性抑制剂3-MA进一步证明自噬。最后用实时定量RT-PCR检测凋亡相关基因Bax和自噬相关基因Beclin 1的表达水平。结果苦参碱能显著抑制Hep G2细胞增殖,呈时间剂量依赖性,并能诱导Hep G2细胞阻滞在细胞周期的G1期。苦参碱以剂量依赖的方式诱导细胞凋亡,对照组总的细胞凋亡率为0.14%,当用0.5、1.0和2.0mg/ml的苦参碱处理Hep G2细胞后,凋亡率分别显著上升至28.91%、34.36%和38.80%。倒置相差显微镜观察到显著的细胞形态学改变。苦参碱组在细胞质中可见大量的大小不等的空泡,而且随着苦参碱浓度的增加胞质中的空泡逐渐增大增多。电镜进一步证实苦参碱干预后的Hep G2细胞内有大量自噬泡形成,应用自噬特异性抑制剂3-MA后自噬泡又明显减少。MDC染色荧光显微镜检测可见苦参碱组比未处理组显示更强的荧光信号和更多的MDC标记颗粒,而3-MA+苦参碱组MDC标记的自噬泡比苦参碱组显著减少。实时定量RT-PCR显示凋亡相关基因Bax和在自噬中起重要作用的Beclin 1基因在苦参碱组的表达均处于一个较高水平。结论苦参碱对肝癌Hep G2细胞具有显著的抗肿瘤活性。苦参碱能够抑制Hep G2细胞增殖并具有细胞周期阻滞作用。而且,苦参碱在诱导Hep G2细胞死亡时凋亡和自噬均被激活,自噬基因Beclin 1参与了苦参碱诱导的自噬,而苦参碱的促凋亡机制可能与其促进凋亡分子Bax的表达相关。因此,苦参碱可能是一种有效治疗肝癌的新型药物。

全文目录

中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
缩略语表  9-11
前言  11-15
材料与方法  15-25
  1. 实验材料  15-18
  2. 实验方法  18-24
  3. 统计学方法  24-25
结果  25-37
讨论  37-42
结论  42-43
参考文献  43-48
在学期间的研究成果  48-49
致谢  49

苦参碱对肝癌Hep G2细胞的抗肿瘤作用：诱导凋亡和自噬

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