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低色氨酸培养基与色氨酸代谢产物联合抑制T细胞增殖的体外研究

作　者: 张树建
导　师: 罗宇东；戴向晨
学　校: 天津医科大学
专　业: 外科学
关键词: 低色氨酸培养基色氨酸代谢产物树突状细胞增殖抑制凋亡免疫耐受
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要

目的：本课题应用小鼠骨髓来源树突细胞(Dendritic Cell, DC)刺激同种异系小鼠T淋巴细胞,应用低色氨酸培养基及色氨酸代谢产物抑制T淋巴细胞增殖,并揭示其抑制T淋巴细胞增殖机制。方法：采用培养基细胞因子选择法体外培养小鼠骨髓来源DC,流式细胞仪检测DC表面抗原CD80、CD86、MHCⅡ、CD11c表达情况,在加入色氨酸代谢产物的低色氨酸培养基中混合淋巴细胞培养并观察对异系T淋巴细胞增殖能力的影响。利用Annexin-V及PI双染法测定T细胞凋亡情况。使用SPSS 15.0软件包进行数据分析。结果：经过体外培养,每只小鼠可获得5-6×106个骨髓来源DC,细胞具备典型树突状结构,高表达CD80 (94.56%)、CD86 (88.42%)、MHC-Ⅱ(86.12%)、CD11c(96.79%)。经免疫磁珠法可分离出纯度达90%以上的CD4+T细胞,进行混合淋巴细胞培养,低色氨酸组较正常色氨酸组刺激指数(SI)明显降低(P<0.001),加入色氨酸代谢产物KYN组、3-HK组、3-HAA组SI值均随其浓度升高而明显降低,且与对照组相比具有统计学差异(P<0.001)。其中以3-HAA抑制CD4+T细胞增殖作用最明显,所需浓度最低。低色氨酸培养基与色氨酸代谢产物对CD4+T细胞增殖的抑制具有叠加作用。Annexin-V及PI双染法测定各组CD4+T细胞凋亡低色氨酸组凋亡率明显升高,且加入色氨酸代谢产物后凋亡率进一步升高(P<0.001)。结论：培养基细胞因子选择法可收获大量的骨髓源DC,免疫磁珠法可分离纯度较高的CD4+T细胞。低色氨酸培养基及色氨酸代谢产物均可抑制CD4+T细胞增殖,并且二者具有叠加效应。其造成CD4+T细胞增殖抑制的机制为“色氨酸饥饿”和“色氨酸代谢产物毒性作用”造成细胞生长停滞甚至凋亡。这为进一步研究器官移植后的免疫耐受提供了实验基础。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-9
缩略语/符号说明  9-11
前言  11-14
  研究现状、成果  11-12
  研究目的、方法  12-14
1 对象与方法  14-21
  1.1 实验材料和对象  14-15
    1.1.1 实验动物  14
    1.1.2 主要试验仪器  14
    1.1.3 主要试剂  14-15
  1.2 原理和方法  15-21
    1.2.1 小鼠骨髓DC体外培养  15-16
    1.2.2 瑞氏染色观察DC形态  16
    1.2.3 流式细胞仪检测DC表面抗原  16-17
    1.2.4 MACS免疫磁珠阳性分选法分离小鼠脾CD4~+T细胞  17-19
    1.2.5 单向混合淋巴细胞培养检测低色氨酸培养基与色氨酸代谢产物对淋巴细胞增殖的抑制能力  19-20
    1.2.6 利用Annexin-V和PI双染法测定CD4~+T细胞凋亡  20-21
    1.2.7 统计方法  21
2 结果  21-32
  2.1 小鼠骨髓DC的培养与鉴定  21-25
  2.2 小鼠脾CD4~+T细胞免疫磁珠分离与鉴定  25
  2.3 单向混合淋巴细胞培养检测低色氨酸培养基与色氨酸代谢产物对淋巴细胞增殖的抑制能力  25-29
  2.4 CD4~+T细胞凋亡测定  29-32
3 讨论  32-40
  3.1 树突细胞概述  32-33
  3.2 树突细胞的培养  33-34
  3.3 树突细胞刺激活化T细胞  34-35
  3.4 低色氨酸培养基与色氨酸代谢产物对淋巴细胞增殖的抑制能力  35-39
  3.5 低色氨酸培养基及色氨酸代谢产物抑制T细胞增殖的机制  39-40
4 小结  40-41
结论  41-42
参考文献  42-47
发表论文和参加科研情况说明  47-48
综述  48-52
综述参考文献  52-55
致谢  55-56

低色氨酸培养基与色氨酸代谢产物联合抑制T细胞增殖的体外研究

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