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3.5GyΧ射线对小鼠间充质干细胞的损伤及其机制的研究

作　者: 刘荟敏
导　师: 孙汉英
学　校: 华中科技大学
专　业: 内科学
关键词: 放射间充质干细胞凋亡衰老 Wnt信号
分类号: R818
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

【目的】探讨小鼠间充质干细胞在中剂量Χ射线照射后的损伤情况、相应机制以及Wnt信号通路在放射后衰老细胞中的表达。【方法】小鼠间充质干细胞C3H10T1/2行3.5GyΧ射线照射,于照射后各时间点行Hoechst33258染色和Annexin V/FITC染色检测细胞凋亡,流式测细胞周期,行SA-β-gal染色检测细胞衰老。采用Realtime PCR技术检测Fas及其配体FasL,p53及其下游组分p21^WAF1基因的表达,免疫荧光法检测细胞Fas蛋白的表达。Realtime PCR技术检测衰老细胞中经典Wnt信号通路中Wnt3a,非经典Wnt信号通路中Wnt5a及与Wnt信号存在串话的shh信号表达。【结果】Hoechst33258染色和Annexin V/FITC染色显示细胞在照射后3h开始出现凋亡,至12h达高峰,此后凋亡率逐渐下降。Fas、FasL mRNA在照射后3h开始增高,12h达到高峰,照射后一周恢复正常。同样,免疫荧光染色显示照射后Fas蛋白表达增加,于照射后6h荧光强度开始增加,至12h呈强阳性反应,至24h基本恢复正常。放射后72hSA-β-gal阳性细胞率和G1期含量均明显高于正常组（P<0.01）,分别为（55.4±5.53% vs1.8±0.9%）和（91.25±2.58% vs70.39±5.15%）。放射后12h P53（约14倍）和P21WAF1（约3.5倍）mRNA表达量升高,放射后72h P53（约1402倍）和P21WAF1（约257倍）mRNA表达量明显升高。以上结果显示放射后72h细胞大量衰老。在衰老细胞中Wnt3a（约12倍）mRNA的表达略升高, Wnt5a（约150倍）的mRNA表达明显升高。shh的mRNA表达无明显变化。【结论】小鼠间充质干细胞在3.5GyΧ射线照射后出现了先凋亡后衰老的损伤规律。Fas/FasL通路在凋亡中占主要作用,p53/p21^WAF1通路在细胞衰老中占主要作用。间充质干细胞放射后衰老细胞中非经典Wnt信号高表达,非经典Wnt信号可能参与了间充质干细胞放射后衰老的过程。

全文目录

英文缩略词表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-10
前言  10-15
材料与方法  15-26
结果  26-33
讨论  33-37
参考文献  37-40
综述 Hh信号通路抑制剂：治疗血液肿瘤的一种新的靶向药物  40-52
  参考文献  48-52
致谢  52

3.5GyΧ射线对小鼠间充质干细胞的损伤及其机制的研究

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