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水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞化疗药物敏感性的影响及机制探讨

作　者: 郭永良
导　师: 田雪飞
学　校: 湖南中医药大学
专　业: 中西医结合临床
关键词: 肝癌 增殖 药物敏感性 凋亡 水蛭
分类号: R735.7
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
下　载: 27次
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内容摘要


目的：探讨水蛭提取物(leech extract, LE)对人肝癌HepG2细胞化疗药物敏感性的影响及机制。方法：比较液氮快速冻融法LE和传统水提醇沉法LE对HepG2细胞增殖的抑制作用并确定提取方法。以氟尿嘧啶(5-Fu)、阿霉素(ADM)对照,分别采用LE与5-Fu或ADM联合用药,体外干预HepG2细胞。采用MTT法检测各组药物对HepG2细胞的增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期,RT-PCR法检测MDR1和baxmRNA的表达,吖啶橙／溴乙锭(AO/EB)荧光染色法观察HepG2细胞凋亡形态。结果：1、液氮快速冻融法制备的LE对人肝癌HepG2细胞增殖有明显抑制作用,细胞数目明显下降,并呈剂量依赖性,与水提醇沉提取法比较,差异有显著统计学意义(P<0.01),从而确定液氮快速冻融法LE为下一步实验用药。2、LE可以增强5-Fu、ADM对HepG2细胞的抑制作用,差异有显著统计学意义(P<0.01)。倒置相差显微镜显示细胞数量明显减少,悬浮的圆细胞增多,细胞周围出现碎片；AO/EB荧光染色法观察到HepG2细胞明显的凋亡形态。3、LE可以增强5-Fu、ADM诱导HepG2细胞凋亡的作用,差异有显著统计学意义(P<0.01)。48h时,各药物组HepG2细胞凋亡率明显高于24h时,差异有显著统计学意义(P<0.01)。4、与5-Fu组比较,LE+5-Fu组HepG2细胞周期表现为GO／G1期、G2/M期细胞比例下降,s期细胞比例上升,差异有显著统计学意义(P<0.01)；与ADM组比较,LE+ADM组HepG2细胞周期表现为GO／G1期细胞比例下降,S期、G2/M期细胞比例上升,差异有显著统计学意义(P<0.01)5、与对照组比较,LE能够下调HepG2细胞MDR1 mRNA的表达,差异有显著统计学意义(P<0.01)；bax mRNA表达水平轻微上调,差异无统计学意义(P>0.05)。结论：1、液氮快速冻融法制备的LE体外抑制HepG2细胞增殖作用明显优于水提醇沉法。2、LE可体外诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,并提高对化疗药物5-Fu、ADM的敏感性。3、通过下调MDR1 mRNA的表达,可能是LE提高HepG2细胞化疗药物敏感性的重要分子机制。

全文目录


缩略语  7-8
中文摘要  8-10
英文摘要  10-13
引言  13-15
第一部分 两种提取方法制备的水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用的对比研究  15-23
  1 材料与方法  15-20
    1.1 细胞株来源  15
    1.2 药物及试剂  15-17
      1.2.1 药物  15
      1.2.2 主要试剂  15-16
      1.2.3 试剂配制方法  16-17
    1.3 主要仪器设备  17-18
    1.4 实验方法  18-20
      1.4.1 制备水蛭超微粉  18
      1.4.2 水蛭提取物的制备  18
      1.4.3 细胞培养  18-19
      1.4.4 MTT法检测水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用  19-20
      1.4.5 细胞计数绘制生长曲线  20
    1.5 统计学处理  20
  2 结果  20-23
    2.1 水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞增殖抑制作用的影响  20-21
    2.2 水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞形态及生长的影响  21-23
第二部分 水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞化疗药物敏感性及MDR1、bax mRNA表达的影响  23-44
  1 材料与方法  23-33
    1.1 细胞株来源  23
    1.2 药物及试剂  23-26
      1.2.1 药物  23
      1.2.2 主要试剂  23-24
      1.2.3 试剂配制方法  24-26
    1.3 主要仪器设备  26-27
    1.4 实验方法  27-33
      1.4.1 水蛭提取物的制备  27-28
      1.4.2 细胞培养  28
      1.4.3 MTT法检测各组药物对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用  28-29
      1.4.4 流式细胞术测定细胞凋亡和细胞周期  29-30
      1.4.5 AO/EB荧光染色观察细胞凋亡形态  30-31
      1.4.6 RT-PCR技术检测MDR1和bax mRNA的表达  31-33
    1.5 统计学处理  33
  2 结果  33-44
    2.1 水蛭提取物对5-Fu、ADM抑制HepG2细胞增殖作用的影响  33-35
    2.2 HepG2细胞的形态变化  35-36
    2.3 HepG2细胞的凋亡情况  36-39
    2.4 HepG2细胞的周期变化  39-41
    2.5 荧光显微镜下HepG2细胞的凋亡形态  41-42
    2.6 水蛭提取物对HepG2细胞MDR1和bax mRNA表达的影响  42-44
第三部分 讨论  44-50
  1 中医医籍中对水蛭及含水蛭的方剂的记载  44-45
  2 水蛭抗肿瘤的现代及临床实验研究  45-46
  3 肿瘤细胞的多药耐药基因MDR1及促凋亡基因bax  46-47
    3.1 多药耐药基因MDR1  46
    3.2 促凋亡基因bax  46-47
  4 水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞增殖的影响  47-49
    4.1 水蛭提取物提取方法对人肝癌HepG2细胞抑制增殖的差异性  47
    4.2 水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞化疗药物敏感性的影响  47-48
    4.3 水蛭提取物对人肝癌HepG2细胞MDR1、bax表达的影响  48-49
  5 进一步研究与展望  49-50
结论  50-51
致谢  51-52
参考文献  52-55
附录1 文献综述  55-65
附录2 攻读硕士学位期间的主要成果  65

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 肝肿瘤
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