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养殖锯缘青蟹支原体病原的分离与鉴定

作　者: 楼丹
导　师: 谢和；杨季芳
学　校: 贵州大学
专　业: 微生物学
关键词: 锯缘青蟹 支原体 分离纯化 生化鉴定 分子鉴定 超微结构 回归感染
分类号: S945
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要


2004年入秋以来,浙江省三门县发生了严重的青蟹疾病,死亡率高,造成了极大的经济损失。据不完全估计,2004年三门县由此造成的经济损失达1.5亿元左右。至今尚无有效的控制方法。本文主要针对三门县近年来发生的锯缘青蟹流行疾病开展研究,分离并确定病原,为病害的预防和控制技术研究提供实验依据和理论基础。本文以浙江省台州市三门县患病养殖锯缘青蟹为研究对象,通过改良Frey培养基对青蟹支原体病原进行分离,利用理化试验和分子生物学研究对分离株进行鉴定,通过分离菌回接健康青蟹确定其致病力,同时利用电镜观察菌株超微结构,得出如下结果：1.本文成功从濒死患病的锯缘青蟹腮、肠组织中分离得到一株支原体,命名为My-1d。在固体培养基上其菌落形态呈典型的“煎蛋状”。理化试验初步确定菌株为支原体科。通过已报道支原体16S rRNA基因序列设计PCR引物并进行扩增、克隆。基因测序分析后证明分离株属于莱氏无胆甾原体(Acholeplasma laidlawii),模式株为PG-8A(登录号：CP000896.1),同缘性达到99%以上。2.菌株My-1d负染后,在电镜下观察发现支原体具高度多形态特征,以链珠状、分枝状、球状、双球状等为主,菌体整体形态呈两头大,中间小。菌株内部切片超微结构观察到支原体无细胞壁,外部为一层原生质膜,胞质染色后类似细颗粒物,内部可见染色较深的核糖体。3.病原回归感染实验证明该支原体能够使健康锯缘青蟹引起疾病和死亡。人工感染患病青蟹症状与自然青蟹发病现象相似,通过电镜观察,可在组织电镜切片中观察到与菌株My-1d相似形态的支原体存在。其中以注射方式感染效果最为显著。

全文目录


目录  2-4
摘要  4-5
Abstract  5-6
第一章 综述  6-20
  第一节 蟹类病害研究进展  6-9
    1 细菌性病害的研究  6-7
    2 立克次体病害研究  7
    3 病毒性病害研究  7-8
    4 支原体病害研究  8-9
  第二节 支原体的生物学特性研究  9-12
    1 形态与结构  9-10
    2 生长特性  10-11
    3 培养特性  11
    4 抵抗力  11-12
  第三节 支原体的微生物学研究  12-13
    1 支原体在自然界中的分布  12
    2 支原体与其他生物的关系  12
    3 传播途径和感染方式  12-13
  第四节 支原体感染危害  13-15
    1 人支原体危害  14
    2 动物支原体危害  14
    3 植物支原体危害  14
    4 支原体对细胞培养危害  14-15
  第五节 支原体的检测技术  15-20
    1 分离培养法  15
    2 电镜检查法  15
    3 血清学检测  15-16
    4 核酸探针检测  16
    5 PCR检测  16-20
研究的目的和意义  20
研究内容  20-62
  第二章 养殖锯缘青蟹支原体病理学研究  21-31
    第一节 自然发病养殖锯缘青蟹超薄切片观察  22-26
      1 材料  22
      2 主要试剂和器材  22-24
      3 方法  24
      4 结果  24-25
      5 讨论  25-26
    第二节 支原体病原的分离与培养  26-31
      1 材料  26
      2 主要试剂及器材  26-27
      3 培养基  27
      4 方法  27-29
      5 结果  29
      6 讨论  29-31
  第三章 分离支原体的鉴定  31-57
    第一节 分离株的生化鉴定  31-38
      1 材料  31
      2 主要试剂及器材  31-32
      3 方法  32-35
      4 结果  35-37
      5 讨论  37-38
    第二节 分离支原体的分子生物学鉴定  38-51
      1 主要试剂和仪器  38-39
      2 方法  39-45
      3 结果  45-49
      4 讨论  49-51
    第三节 分离支原体的超微结构观察  51-57
      1 材料  51
      2 方法  51-52
      3 结果  52-54
      4 讨论  54-57
  第四章 分离支原体的病原生物学研究  57-62
    第一节 养殖锯缘青蟹支原体人工感染及症状观察  57-60
      1 材料  57
      2 主要试剂及器材  57
      3 方法  57-58
      4 结果  58-59
      5 讨论  59-60
    第二节 人工感染青蟹超薄切片观察  60-62
      1 方法  60
      2 结果  60-61
      3 讨论  61-62
总结  62
展望  62-63
参考文献  63-67
致谢  67-68
附录  68-69

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中图分类: > 农业科学 > 水产、渔业 > 水产保护学 > 甲壳类病虫害及其防治
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