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CREB在前列腺癌细胞DU145中的表达机制及抗癌功能分析

作　者: 李玲
导　师: 李万程
学　校: 湖南师范大学
专　业: 细胞生物学
关键词: 前列腺癌 DU145 CREB 细胞生长 细胞凋亡
分类号: R737.25
类　型: 硕士论文
年　份: 2014年
下　载: 4次
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内容摘要


细胞信号传导对于细胞的增殖、分化、凋亡、及它们之间的相互作用都极为重要,并受诸多因子的控制。CREB,即第二信使cAMP反应元件结合蛋白,是核内转录因子。CREB由341个氨基酸构成,该蛋白质属于富含亮氨酸拉链结构(bZIP)超蛋白家族成员之一。CREB的二级结构有两个功能区构成：C端富含碱性氨基酸,其中包含一个亮氨酸拉链区(Leucine zipper region),它是一段约50个氨基酸残基组成的序列,亮氨酸在其中是周期性出现的。该区域与DNA的亲和力强,能够形成卷曲的螺旋构象,被称为DNA结构域；N端是富含酸性氨基酸的转录调节域,该区可以细分为以下几个结构域,KID区(多种激酶诱导结构域)、X区(拮抗KID区的功能)、A区(增强CREB转录功能)、Q3区(刺激转录活性的关键部位)、Q2区(辅助转录作用)和PRO区(协助发挥转录作用),这些区域协调配合共同对转录调控起作用。作为核内转录调控因子的CREB参与细胞的各种生命活动。已有研究发现CREB依赖其磷酸化,对靶基因上的启动子调控,最终影响各种细胞周期相关蛋白如CDKs, Cyclins, CKIs的转录,进而调节细胞的周期。CREB对细胞的调控还涉及到细胞凋亡。有研究表明在人体心肌细胞中,过氧化酶体能刺激受体α(PPAR α)的过表达,受体α通过抑制Bcl-2诱发细胞凋亡,而上调心肌细胞中CREB的表达能够拮抗受体α对Bcl-2的抑制作用,从而对心肌细胞的凋亡起保护作用。此外,CREB与肿瘤细胞的凋亡也密切相关,关于非小细胞肺癌细胞株(NSCLC)的研究发现,用RNAi抑制CREB的表达后,能够抑制非小细胞肺癌细胞株的凋亡。CREB与细胞周期和细胞凋亡的相关性,以及与肿瘤细胞凋亡的密切关联,揭示了CREB在癌症发生中的重要作用,为本实验利用DU145细胞来研究CREB在前列腺癌中的作用提供依据。本实验通过建立PP2A的正调控因子CREB的过表达细胞系DU145-CREB及对照组空载细胞系DU145-Neo进行细胞生长曲线测定、细胞迁移实验、裸鼠荷瘤实验以及蛋白质印迹等实验,在细胞水平,蛋白水平以及组织水平探究CREB在前列腺癌细胞DU145中的调控机制。实验结果显示过表达CREB的DU145细胞比空载的DU145细胞的增长速度慢,DU145-CREB细胞系比空载DU145-Neo细胞系的迁移能力弱,且裸鼠荷瘤实验发现注射DU145-CREB细胞系的裸鼠体内的肿瘤比注射空载DU145-Neo细胞系的肿瘤小。之后对所取肿瘤进行石蜡切片,发现注射DU145-Neo细胞所成的肿瘤组织比注射DU145-CREB细胞所成的肿瘤组织内的血管分布明显,细胞数目更多,处在分裂期的细胞数目也多。初步可推测CREB具有抑制前列腺癌生成的效果。为进一步探究前列腺癌的发生与调控机制奠定基础,也为前列腺癌的治疗提供理论依据。

全文目录


摘要  3-5
Abstract  5-8
目录  8-11
第一章 前言  11-31
  1 细胞信号通路的介绍  11-12
  2 第二信使cAMP反应元件结合蛋白(CREB)  12-22
    2.1 CREB的分子结构  13-14
    2.2 真核生物的基因结构  14-16
    2.3 CREB作为转录因子与DNA结合的机制  16-18
    2.4 CREB相关的信号通路  18-20
    2.5 CREB对细胞的调控  20-22
  3 细胞凋亡  22-25
    3.1 细胞凋亡相关因子  22-24
    3.2 Bax凋亡相关蛋白的介绍  24-25
  4 前列腺癌  25-27
    4.1 前列腺癌细胞的介绍  25-26
    4.2 前列腺癌细胞DU145  26-27
  5 蛋白磷酸酶  27-29
    5.1 蛋白磷酸酶的概述  27
    5.2 PP2A的简述  27-28
    5.3 PP2A与细胞凋亡  28-29
  6 本实验的研究背景  29-31
第二章 实验材料和实验方法  31-43
  1. 实验材料  31-32
    1.1 细胞系  31
    1.2 实验试剂  31
    1.3 实验仪器  31-32
  2 实验方法  32-43
    2.1 培养细胞及细胞增长曲线测定  32-34
    2.2 裸鼠荷瘤实验  34-35
    2.3 肿瘤组织切片  35-38
    2.4 细胞迁移实验  38
    2.5 蛋白质印迹分析  38-43
第二章 实验结果和实验结论  43-54
  1 实验结果  43-51
    1.1 过表达CREB对前列腺癌细胞增殖的影响  43-44
    1.2 CREB对前列腺癌DU145的致瘤能力的影响  44-46
    1.3 肿瘤细胞伤愈实验分析细胞的迁移率  46-47
    1.4 细胞内蛋白表达的分析  47-49
    1.5 肿瘤组织切片的病理分析  49-51
  2 讨论与展望  51-54
    2.1 CREB的过表达能抑制前列腺癌DU145的增殖、细胞迁移能力以及致瘤能力  51-52
    2.2 肿瘤细胞内的凋亡相关蛋白分析  52-53
    2.3 展望  53-54
参考文献  54-59
附录  59-60

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 泌尿生殖器肿瘤 > 男性生殖器肿瘤 > 前列腺肿瘤
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