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罗汉果块根内生真菌及其次级代谢产物的研究

作　者: 付东兴
导　师: 陈海燕
学　校: 广西大学
专　业: 有机化学
关键词: 罗汉果内生真菌次级代谢产物发酵分离纯化
分类号: S567.239
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

罗汉果(Siraitia grosvenori)是我国传统的药食两用植物,该植物主要分布在我国广东、广西、湖南、云南、贵州等地。它具有治疗呼吸系统疾病,增强机体细胞免疫功能,降低血压等药用功效。据统计,有相关大量文献针对罗汉果植物组织内的化学成分的研究,然而关于罗汉果内生真菌的相关报道却非常少。植物内生真菌独特多样性的微生物类群,造就了其非常丰富的次级代谢产物,是近年来人们寻找新型杀虫、抗菌、抗肿瘤天然药物的重要资源。本实验通过严格的表面消毒处理及无菌操作,从无籽罗汉果果实中共分离纯化了13株菌体,并对这些菌株进行了传统形态学的观察与记录。通过微量元素的调节对实验室保藏的菌株进行初步筛选,选择SG-69和SG-92菌株实施静息发酵培养100L,发酵液浓缩后用等体积乙酸乙酯萃取减压浓缩得到浸膏,菌丝体用甲醇浸泡后浓缩得到浸膏。将所得浸膏利用常压硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析、重结晶等方法手段,分离纯化得到了18个化合物。并利用IR、MS、1H NMR、13C NMR、DEPT等光谱手段,结合化合物的理化性质,与相关文献对照,共解析鉴定了其中的11个化合物,分别是对羟基苯甲酸、白僵菌酮、对羟基苯甲酸乙酯、麦角甾-5,7,22-三烯-3β-醇、二(5-丁基-2-吡啶甲酸-N1-O02)合铜.二甲醇、苯乙酸、邻羟基苯甲酸、过氧化麦角甾醇、尿囊素、甘露醇、尿嘧啶。其中对羟基苯甲酸乙酯、邻羟基苯甲酸、过氧化麦角甾醇、尿囊素首次从罗汉果块根内生真菌次级代谢产物中分离得到。近年来,新药研究的一个热点问题在于天然药物的筛选,大多数情况下以天然产物为先导,本论文研究了罗汉果内生真菌及其次级代谢产物,为新药的开发和应用,以及新药源的发现提供理论依据。

全文目录

摘要  4-6
ABSTRACT  6-12
符号说明  12-13
第一章绪论  13-23
  1.1 罗汉果简介  13
  1.2 植物内生真菌的简介  13-15
    1.2.1 植物内生真菌的定义与分类  13-14
    1.2.2 植物内生真菌的分布及影响分布的因素  14
    1.2.3 植物内生真菌的作用  14-15
    1.2.4 植物内生真菌的应用前景  15
  1.3 植物内生真菌次级代谢产物的研究进展  15-21
    1.3.1 抗氧化类活性次级代谢产物  16
    1.3.2 抗生素类活性次级代谢产物  16-18
    1.3.3 抗肿瘤类活性次级代谢产物  18-20
    1.3.4 抗虫害活性次级代谢产物  20
    1.3.5 酶抑制活性次级代谢产物  20-21
  1.4 本课题研究意义  21-22
  1.5 本课题研究技术路线  22-23
第二章无籽罗汉果果实内生真菌的分离与纯化  23-30
  2.1 前言  23
  2.2 研究样品来源  23
  2.3 实验仪器与试剂  23-24
  2.4 实验前处理  24
    2.4.1 培养基的准备  24
    2.4.2 无菌设备的准备  24
  2.5 分离内生真菌消毒方案的提出  24-25
  2.6 消毒时间的确定  25-26
  2.7 无籽罗汉果果实内生真菌的分离过程  26-27
  2.8 内生真菌的保藏方法  27
    2.8.1 低温斜面保藏  27
    2.8.2 蒸馏水保藏  27
  2.9 实验结果  27-29
  2.10 本章小结  29-30
第三章罗汉果块根内生真菌次级代谢产物的分离  30-58
  3.1 前言  30
  3.2 实验仪器与试剂  30-31
    3.2.1 实验仪器  30-31
    3.2.2 实验试剂  31
  3.3 菌株与发酵培养  31-34
    3.3.1 菌株来源  31
    3.3.2 菌株的筛选  31-32
    3.3.3 发酵培养基  32
    3.3.4 发酵培养实施方案  32-33
    3.3.5 发酵后处理方案  33-34
      3.3.5.1 发酵液处理方案  33
      3.3.5.2 菌体处理方案  33-34
  3.4 内生真菌次级代谢产物的分离  34-40
    3.4.1 分离方法  34-35
      3.4.1.1 薄层层析(TLC)检测  34
      3.4.1.2 硅胶柱层析的制备  34-35
      3.4.1.3 Sephadex LH-20的制备  35
    3.4.2 内生真菌SG-69次级代谢产物分离流程图  35-37
    3.4.3 内生真菌SG-92次级代谢产物分离流程图  37-39
    3.4.4 内生真菌次级代谢产物分离细节  39-40
      3.4.4.1 SG-69次级代谢产物的分离  39
      3.4.4.2 SG-92次级代谢产物的分离  39-40
  3.5 分离化合物的结构鉴定  40-53
    3.5.1 SG-69内生真菌分离得到化合物的结构鉴定  40-46
      3.5.1.1 化合物Ⅰ的结构解析  40
      3.5.1.2 化合物Ⅱ的结构解析  40-41
      3.5.1.3 化合物Ⅲ的结构解析(D3)  41
      3.5.1.4 化合物Ⅳ的结构解析  41-42
      3.5.1.5 化合物Ⅴ的结构解析(F1)  42-43
      3.5.1.6 化合物Ⅵ的结构解析  43
      3.5.1.7 化合物Ⅶ的结构解析  43-45
      3.5.1.8 化合物Ⅷ的结构解析  45
      3.5.1.9 化合物Ⅸ的结构解析(F16)  45-46
      3.5.1.10 化合物Ⅹ的结构解析  46
    3.5.2 SG-92内生真菌分离得到化合物的结构鉴定  46-53
      3.5.2.1 化合物Ⅺ的结构解析  46-47
      3.5.2.2 化合物Ⅻ的结构解析(F15)  47
      3.5.2.3 化合物ⅩⅢ结构解析  47-48
      3.5.2.4 化合物ⅩⅣ的结构解析  48-50
      3.5.2.5 化合物ⅩⅤ的结构解析(F32)  50
      3.5.2.6 化合物ⅩⅥ的结构解析  50-51
      3.5.2.7 化合物ⅩⅦ的结构解析  51-52
      3.5.2.8 化合物ⅩⅧ的结构解析  52-53
  3.6 化合物的实验数据  53-58
    3.6.1 SG-69内生真菌分离得到化合物的实验数据  53-55
      3.6.1.1 化合物Ⅰ的实验数据  53
      3.6.1.2 化合物Ⅱ的实验数据  53
      3.6.1.3 化合物Ⅲ的实验数据  53
      3.6.1.4 化合物Ⅳ的实验数据  53-54
      3.6.1.5 化合物Ⅴ的实验数据  54
      3.6.1.6 化合物Ⅵ的实验数据  54
      3.6.1.7 化合物Ⅶ的实验数据  54
      3.6.1.8 化合物Ⅷ的实验数据  54-55
      3.6.1.9 化合物Ⅸ的实验数据  55
      3.6.1.10 化合物Ⅹ的实验数据  55
    3.6.2 SG-92内生真菌分离得到化合物的实验数据  55-58
      3.6.2.1 化合物Ⅺ的实验数据  55
      3.6.2.2 化合物Ⅻ的实验数据  55
      3.6.2.3 化合物ⅩⅢ的实验数据  55
      3.6.2.4 化合物ⅩⅣ的实验数据  55-56
      3.6.2.5 化合物ⅩⅤ的实验数据  56
      3.6.2.6 化合物ⅩⅥ的实验数据  56
      3.6.2.7 化合物ⅩⅦ的实验数据  56-57
      3.6.2.8 化合物ⅩⅧ的实验数据  57-58
第四章结论与展望  58-60
  4.1 结论  58
    4.1.1 内生真菌的分离与纯化  58
    4.1.2 无机离子对内生真菌的初步筛选  58
    4.1.3 内生真菌次级代谢产物的研究  58
  4.2 展望  58-60
    4.2.1 内生真菌的筛选的构想  58
    4.2.2 内生真菌次级代谢产物发酵生产的构想  58-60
参考文献  60-66
附录部分化合物图谱  66-84
  附录1 SG-69化合物Ⅲ  66-68
  附录2 SG-69化合物Ⅳ  68-70
  附录3 SG-69化合物Ⅴ  70-74
  附录4 SG-69化合物Ⅵ  74-76
  附录5 SG-69化合物Ⅶ  76-79
  附录6 SG-92化合物Ⅻ  79-80
  附录7 SG-92化合物ⅩⅣ  80-82
  附录8 SG-92化合物ⅩⅥ  82-84
致谢  84-85
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