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sCD40L联合LY294002对胃癌AGS细胞生长及侵袭转移影响的实验研究

作　者: 汤美
导　师: 陈卫昌
学　校: 苏州大学
专　业: 内科学
关键词: 胃癌AGS细胞 sCD40L 生长抑制 凋亡 LY294002 侵袭转移 协同效应 PI3K p-Akt VEGF
分类号: R735.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2010年
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内容摘要


第一部分sCD40L对胃癌AGS细胞生长的影响目的探讨sCD40L(可溶性CD40配体)对胃癌AGS细胞体外生长和凋亡的影响。方法采用不同浓度sCD40L处理胃癌AGS细胞,四氮唑盐(MTT)法检测AGS细胞经sCD40L作用后生存率的变化,流式细胞术(FCM)检测AGS细胞周期和凋亡的变化。结果MTT结果显示一定浓度的sCD40L可抑制AGS细胞的生长,并随着浓度的增加和作用时间的延长而明显增强(P<0.05)。流式细胞术显示AGS细胞经sCD40L作用48h后,细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,并呈现浓度依赖性(P<0.05),AGS细胞经sCD40L作用48h后,细胞无明显的凋亡现象(凋亡率<5%)。结论sCD40L通过阻滞细胞周期抑制胃癌AGS细胞生长,作用呈时间和剂量依赖性。第二部分LY294002对胃癌AGS细胞生长的影响目的探讨LY294002(PI3K/Akt信号通路特异性阻断剂)对胃癌AGS细胞体外生长和凋亡的影响。方法采用不同浓度LY294002处理胃癌AGS细胞,MTT法检测AGS细胞经LY294002作用后生存率的变化,流式细胞术检测AGS细胞周期和凋亡的变化。结果MTT结果显示一定浓度的LY294002可抑制AGS细胞的生长,并随着浓度的增加和作用时间的延长而明显增强(P<0.05)。流式细胞术显示AGS细胞经LY294002作用48h后,细胞周期阻滞于G1期,G1期细胞比例上升,S期细胞比例下降,AGS细胞有明显凋亡,并呈现浓度依赖性(P<0.05)。结论LY294002通过阻滞细胞周期及诱导细胞凋亡抑制胃癌AGS细胞的生长,且呈时间和剂量的依赖性。第三部分sCD40L联合LY294002对胃癌AGS细胞生长及侵袭转移的影响目的探讨sCD40L联合LY294002对胃癌AGS细胞体外生长及侵袭、转移的影响,并初步探讨其可能的作用机制。方法MTT法检测sCD40L(2ug/ml)、LY294002(20μmol/L)及两者联合应用对AGS细胞生长的影响;流式细胞术观察AGS细胞凋亡和细胞周期的变化;透射电镜检测AGS细胞形态变化;Transwell实验和划痕实验分析AGS细胞侵袭、转移能力的改变;免疫印迹法(Western blot)检测AGS细胞PI3K、p-Akt、VEGF蛋白的表达。结果(1)MTT结果显示,sCD40L和LY294002均能抑制胃癌AGS细胞生长,两者联合作用后具有协同效应(P<0.05);(2)流式细胞术显示,LY294002及sCD40L均可阻滞AGS细胞周期,两者联合作用细胞周期阻滞明显增强(P<0.05),sCD40L对AGS细胞凋亡无明显影响,LY294002可诱导AGS细胞凋亡,两者联合作用后细胞凋亡明显增加(P<0.05);(3)透射电镜检测显示,对照组及sCD40L组AGS细胞未出现明显的凋亡形态学改变,而联合用药组的部分细胞出现细胞核固缩,染色质呈新月状边集等凋亡形态学改变;(4)Transwell实验和划痕实验显示sCD40L及LY29400均可抑制AGS细胞的侵袭、转移,两者联合作用后对AGS细胞的侵袭、转移抑制明显增强(P<0.05);(5)Western blot结果显示,与对照组相比,sCD40L组AGS细胞PI3K、p-Akt蛋白表达明显升高,LY294002组与联合用药组AGS细胞PI3K、p-Akt蛋白表达明显降低(P<0.05),sCD40L组和LY294002组AGS细胞VEGF蛋白表达降低,两者联合作用AGS细胞VEGF蛋白表达更加降低(P<0.05)。结论CD40信号活化后通过介导PI3K/Akt信号活化拮抗其诱导的机体抗胃癌效应,LY294002可显著增强sCD40L对胃癌AGS细胞生长和侵袭转移的抑制作用。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-10
前言  10-14
  参考文献  12-14
第一部分 sCD40L 对胃癌AGS 细胞生长的影响  14-23
  材料与方法  14-16
  结果  16-19
  讨论  19-20
  参考文献  20-23
第二部分 LY294002 对胃癌AGS 细胞生长的影响  23-31
  材料与方法  23-25
  结果  25-27
  讨论  27-29
  参考文献  29-31
第三部分 sCD40L 联合LY294002 对胃癌AGS 细胞生长及侵袭转移能力的影响  31-51
  材料与方法  31-37
  结果  37-45
  讨论  45-49
  参考文献  49-51
结论  51-52
综述 胃癌免疫治疗的研究进展  52-65
  正文  52-60
  参考文献  60-65
攻读学位期间公开发表的论文  65-66
缩略词表  66-67
致谢  67-69

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胃肿瘤
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