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HSP90抑制剂17-AAG对人肾癌细胞生物学行为影响的体外研究

作　者: 晏湘山
导　师: 严春寅
学　校: 苏州大学
专　业: 泌尿外科学
关键词: 肾细胞癌缺氧诱导因子-2α 热休克蛋白90 17-AAG Caki-1
分类号: R737.11
类　型: 硕士论文
年　份: 2009年
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内容摘要

目的观察HSP90抑制剂17-AAG在缺氧状态下对人肾癌Caki-1细胞的增殖抑制作用和放射增敏作用,并初步探讨其产生增殖抑制作用和放射增敏作用的机制。方法（1）体外培养人肾癌Caki-1细胞株。（2）MTT比色法检测在缺氧状态下不同时间和不同浓度的17-AAG对人肾癌细胞株Caki-1细胞的增殖抑制作用。（3）将终浓度为80nmol/L 17-AAG作用于人肾癌细胞株Caki-1（实验组）,分别在常氧和缺氧状态下进行培养。同时设立阴性对照组和空白对照组。采用MTT比色法检测三组细胞不同时间OD570值;倒置显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot法检测HIF-2α蛋白表达。（4）在缺氧状态下将终浓度为10nmol/L 17-AAG作用于人肾癌细胞株Caki-1,用不同剂量6MV-X射线照射,采用集落形成实验检测17-AAG对Caki-1细胞的放射增敏效应。结果（1）在缺氧状态下,HSP90抑制剂17-AAG对人肾癌细胞株Caki-1具有增殖抑制作用,且具有时间剂量依赖性。（2）在常氧状态下,三组Caki-1细胞的OD570值之间差别无统计学意义（P>0.05）。在缺氧状态下,48h后缺氧实验组各时间点OD570值明显低于缺氧空白组和缺氧阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。（3）流式细胞术检测常氧状态下,三组细胞凋亡率低,三者之间差别无统计学意义（P>0.05）,而在缺氧状态下,实验组凋亡率高于缺氧空白组和缺氧阴性对照组（P<0.05）。（4）Western blot法检测显示:在常氧状态下,实验组细胞HIF-2α蛋白表达受到抑制,低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）。在缺氧状态下,实验组HIF-2α蛋白表达受到抑制,低于阴性对照组和空白对照组（P<0.05）。缺氧阴性对照组和缺氧空白对照组的HIF-2α蛋白表达分别与常氧阴性对照组和常氧空白对照组相比较,表达明显增强（P<0.05）。而缺氧实验组HIF-2α蛋白表达与常氧实验组比较,差别无统计学意义（P>0.05）。（5）集落形成实验结果及存活曲线相关参数显示出放射敏感性指标D₀、SF₂、Dq均呈现不同程度的下降,D0增敏比达到1.3169。结论在缺氧状态下,HSP90抑制剂17-AAG对人肾癌细胞株Caki-1具有明显的增殖抑制作用,促进肿瘤细胞发生凋亡。其诱导人肾癌细胞株Caki-1细胞凋亡的机制与其下调HIF-2α的表达有关。在缺氧状态下,17-AAG可以提高人肾癌细胞株Caki-1细胞的放射敏感性。

全文目录

中文摘要  3-5
Abstract  5-8
前言  8-10
材料与方法  10-18
结果  18-26
讨论  26-31
结论  31-32
参考文献  32-35
综述  35-44
攻读学位期间公开发表论文  44-45
中英文对照缩略词表  45-46
致谢  46

HSP90抑制剂17-AAG对人肾癌细胞生物学行为影响的体外研究

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