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复方中草药对吉富罗非鱼免疫相关基因表达的影响

作　者: 王家敏
导　师: 简纪常；吴灶和
学　校: 广东海洋大学
专　业: 水产养殖
关键词: 吉富罗非鱼复方中草药肿瘤坏死因子-α 白介素-1β 热应激蛋白70基因
分类号: S965.125
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

本试验以健康的吉富罗非鱼为试验动物,研究在罗非鱼基础饲料中添加不同剂量的复方中草药对其免疫相关基因表达量的影响,确定复方中草药的添加剂量,以初步探讨复方中草药对吉富罗非鱼的作用机理。选用健康、规格整齐的吉富罗非鱼(体重19.62±0.06 g)随机分为5组,按科学的饲养方法进行饲养管理。对照组投喂基础饲料,0.5组、1.0组、1.5组和2.0组为试验组分别投喂添加0.5%,1%,1.5%和2%复方中草药的饲料,复方中草药是由黄芪、当归、甘草和山植等6种中草药按一定比例配比制备成。养殖试验共进行28天。在投喂后的第7天、第14天、第21天和第28天,分别提取试验组和对照组的肝脏、鳃、胸腺、头肾和脾脏5种组织中的总RNA并反转录成cDNA,利用Real-time PCR方法对不同组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1(IL-1β)和热应激蛋白70基因(Hsp70)等3种免疫相关基因的表达进行定量分析。养殖实验结束,用1×108 cfu/mL嗜水气单胞菌攻毒,测定复方中草药对罗非鱼抗病力的影响。结果表明:添加一定剂量的复方中草药能诱导吉富罗非鱼Hsp70、TNF-α和IL-1β基因在头肾、肝脏、胸腺、鳃和脾脏5种组织中表达。在第7天,1.5剂量组和2.0剂量组在脾脏、头肾、鳃和胸腺组织中IL-1β基因表达量显著高于同期对照组(P<0.05)。在第14天,1.0剂量组在鳃中IL-1β基因的表达量显著高于同期对照组(P<0.05)并达到峰值。在第28天,0.5剂量组在脾脏和鳃中IL-1β基因表达量达到最大量显著高于同期对照组(P<0.05)。在头肾组织中,各个剂量组吉富罗非鱼IL -1β基因表达量显著高于同期对照组(P<0.05)。在第7天时,2.0剂量组在头肾、脾脏和胸腺组织中TNF-α基因表达量显著高于同期对照组(P<0.05)。在第28天时,0.5剂量组在脾脏、肝脏、胸腺和头肾组织中TNF-α基因表达量显著高于同期对照组(P<0.05)。在整个试验阶段,1.0剂量组在在脾脏中TNF-α基因表达量均显著高于同期对照组(P<0.05),并在第14天时TNF-α基因表达量达到峰值。在整个试验期间,1.5剂量组在胸腺、脾脏和头肾中TNF-α基因表达量均显著高于同期对照组(P<0.05)。在投喂第7天后,1.5剂量组和2.0剂量组在胸腺、鳃、头肾和脾脏中Hsp70基因表达量显著性高于同期对照组(P<0.05)。在第28天,0.5剂量组在脾脏、胸腺、肝脏、鳃和头肾组织中Hsp70基因表达量均显著高于同期对照组(P<0.05)。在第28天,1.0剂量组在胸腺中Hsp70基因表达量达到最大量显著高于同期对照组(P<0.05)。1.0剂量组在整个实验的各个阶段肝脏组织中Hsp70基因表达量与同期对照组无显著性差异(P>0.05);相对免疫保护率以2.0剂量组(61.6﹪)最高,次之是1.5剂量组的(53.8﹪)。本复方中草药可以提高吉富罗非鱼肝脏、鳃、胸腺、头肾和脾脏5种组织中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白介素1(IL-1β)和热应激蛋白70基因(Hsp70)等3种免疫相关基因表达。高剂量组吉富罗非鱼TNF-α、IL-1β和Hsp70基因在五种组织中的表达量绝大部分在第7天就出现峰值,而低剂量组大部分在第28天才出现峰值。经过对本实验结果的综合分析,建议在吉富罗非鱼基础饲料中添加1.5%-2.0%的本复方中草药为宜。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-13
1 前言  13-23
  1.1 研究的对象  13
    1.1.1 罗非鱼  13
    1.1.2 中草药  13
  1.2 中草药及其在水产养殖上的应用  13-18
    1.2.1 中草药的特性  14-15
    1.2.2 对水产动物具有免疫活性的中草药种类  15
    1.2.3 中草药中具有提高免疫能力的活性成分  15-17
    1.2.4 中草药的常用给药方法  17-18
  1.3 中草药在水产养殖方面的应用研究进展  18-22
    1.3.1 中草药对水产动物生长性能的影响  18
    1.3.2 中草药对水产动物免疫器官发育的影响  18-19
    1.3.3 中草药对水产动物免疫吞噬细胞的影响  19
    1.3.4 中草药对水产动物非特异性免疫指标的影响  19-20
    1.3.5 中草药对水产动物抗应激作用的影响  20-21
    1.3.6 中草药对养殖动物细胞因子的影响  21-22
  1.4 研究的目的和意义  22-23
2 复方中草药对吉富罗非鱼 IL-1β基因表达的影响  23-37
  2.1 材料与方法  23-31
    2.1.1 试验材料  23-24
    2.1.2 实验方法  24-31
  2.2 结果  31-35
    2.2.1 复方中草药对吉富罗非鱼头肾组织中IL-1β基因表达的影响  31-32
    2.2.2 复方中草药对吉富罗非鱼脾脏组织中IL-1β基因表达的影响  32
    2.2.3 复方中草药对吉富罗非鱼鳃组织中IL-1β基因表达的影响  32-33
    2.2.4 复方中草药对吉富罗非鱼胸腺组织中IL-1β基因表达的影响  33-34
    2.2.5 复方中草药对吉富罗非鱼肝脏组织中IL-1β基因表达的影响  34-35
  2.3 讨论  35-37
3 复方中草药对吉富罗非鱼 TNF-α基因表达的影响  37-45
  3.1 材料与方法  37-39
    3.1.1 试验材料  37
    3.1.2 实验方法  37-39
  3.2 结果  39-43
    3.2.1 复方中草药对吉富罗非鱼头肾组织中TNF-α基因表达的影响  39-40
    3.2.2 复方中草药对吉富罗非鱼脾脏组织中TNF-α基因表达的影响  40
    3.2.3 复方中草药对吉富罗非鱼鳃组织中TNF-α基因表达的影响  40-41
    3.2.4 复方中草药对吉富罗非鱼胸腺组织中TNF-α基因表达的影响  41-42
    3.2.5 复方中草药对吉富罗非鱼肝脏组织中TNF-α基因表达的影响  42-43
  3.3 讨论  43-45
4 复方中草药对吉富罗非鱼 Hsp70 基因表达的影响  45-51
  4.1 材料与方法  45-46
    4.1.1 试验材料  45
    4.1.2 实验方法  45-46
  4.2 结果  46-49
    4.2.1 复方中草药对吉富罗非鱼头肾组织中Hsp70 基因表达的影响  46-47
    4.2.2 复方中草药对吉富罗非鱼脾脏组织中Hsp70 基因表达的影响  47
    4.2.3 复方中草药对吉富罗非鱼鳃组织中Hsp70 基因表达的影响  47-48
    4.2.4 复方中草药对吉富罗非鱼胸腺组织中Hsp70 基因表达的影响  48-49
    4.2.5 复方中草药对吉富罗非鱼肝脏组织中Hsp70 基因表达的影响  49
  4.3 讨论  49-51
5 复方中草药对吉富罗非鱼免疫保护率的影响  51-55
  5.1 材料与方法  51-52
    5.1.1 试验材料  51
    5.1.2 实验方法  51-52
  5.2 结果  52-53
    5.2.1 复方中草药对吉富罗非鱼免疫保护率的影响  52-53
  5.3 讨论  53-55
6 结论  55-56
参考文献  56-63
致谢  63-64
作者简介  64-65
导师简介  65

复方中草药对吉富罗非鱼免疫相关基因表达的影响

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