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AMSCs复合壳聚糖复合支架移植对兔退变早期椎间盘内TNF-α、IL-1β的影响

作　者: 李进珍
导　师: 李放
学　校: 山西医科大学
专　业: 骨科学
关键词: 椎间盘退变组织工程脂肪间充质干细胞壳聚糖肿瘤坏死因子α 白介素1β
分类号: R681.53
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

目的:1. AMSCs(脂肪间充质干细胞)复合可注射温敏型壳聚糖/β甘油磷酸钠/Ⅰ型胶原支架移植对退变早期兔椎间盘内TNF-α、IL-1β含量变化影响,并分析其意义。2.观察BrdU标记对AMSCs增殖作用影响,并对其标记的AMSCs在椎间盘内存活能力进行观察。方法:从兔脂肪组织中提取脂肪间充质干细胞,体外培养3代,基础培养基中加入终浓度为25μmol/L的BrdU,与未添加培养的AMSCs行MTT试验,观察BrdU对细胞增殖影响,并行细胞免疫荧光染色,观察细胞标记情况。将BrdU的第三代标记的AMSCs植入椎间盘体内,术后2、4、8周行目标椎间盘免疫组化染色,观察AMSCs存活情况。选取24只新西兰大白兔,雌雄不限,随机分为髓核抽吸组、脂肪干细胞壳聚糖支架复合移植组、单纯支架移植组以及单纯椎间盘暴露组。每组动物都选择L2-3、L3-4、L4-5、L5-6椎间盘为研究对象,造模的同时将第三代AMSCs与可注射温敏型壳聚糖/β甘油磷酸钠/Ⅰ型胶原支架注入到椎间盘内,于术后2、4、8周分别将每组两只兔子处死,使用ELISA方法检测L2-3、L3-4、L4-5、L5-6椎间盘内TNF-α、IL-1β含量,并进行组间比较。结果:25μmol/L Brdu对AMSCs生长情况与正常培养的AMSCs行MTT试验未见明显差异(P>0.05)。2、4、8周椎间盘免疫荧光染色均见AMSCs,但8周时明显降低。24只动物均存活。标准对照组(髓核抽吸)与空白对照组(单纯椎间盘暴露)相比较,TNF-α、IL-1β浓度均较高,差异有统计学意义(P<0.05);脂肪干细胞-壳聚糖支架复合移植组、单纯壳聚糖支架植入组与标准对照组相比较,TNF-α、IL-1β浓度均降低,差异有显著性(P<0.05);脂肪干细胞-壳聚糖支架复合移植组与单纯壳聚糖支架植入组相比较,8周时,IL-β降低有显著差异性。结论:1. BrdU标记后的AMSCs增殖克隆未受明显影响。2.BrdU可以应用于AMSCs为种子细胞的椎间盘组织工程干细胞移植的示踪剂。3. C/Gp/Co水凝胶支架具备温敏可注射,为椎间盘细胞移植的较理想支架材料。4. AMSCs与C/Gp/Co支架构建的复合体移植对早期兔椎间盘退变抑制TNF-α、IL-1β作用,AMSCs在椎间盘内可能有免疫抑制作用,并改善炎症反应。

全文目录

缩略语  5-6
中文摘要  6-7
英文摘要  7-9
引言  9-11
1 材料与方法  11-20
2 结果  20-25
3 讨论  25-28
4 结论  28-29
5 参考文献  29-32
文献综述  32-38
  参考文献  36-38
附录  38-42
个人简介  42-43
致谢  43

AMSCs复合壳聚糖复合支架移植对兔退变早期椎间盘内TNF-α、IL-1β的影响

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