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硒诱导胰腺癌细胞程序性死亡及作用机制研究

作　者: 韦颍昕
导　师: 赵玉沛
学　校: 北京协和医学院
专　业: 普通外科学
关键词: 亚硒酸钠 胰腺癌 凋亡 自噬 Wnt/β-catenin
分类号: R735.9
类　型: 博士论文
年　份: 2013年
下　载: 25次
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内容摘要


研究背景胰腺癌是一种早期诊断困难、手术切除率低的恶性肿瘤,化疗是进展期胰腺癌的重要治疗手段,但包括吉西他滨在内的化疗药物对患者的生存时间并无明显改善。因此,寻找新的化学药物改善胰腺癌患者的预后,具有重要的意义。硒已被证实具有较好的肿瘤预防作用,近年来多项研究显示硒化合物具有抗肿瘤的作用,但其具体作用机制尚不清楚。程序性死亡是在基因调控下的细胞死亡,包括凋亡和自噬两种形式。最新的研究显示,程序性死亡参与了肿瘤细胞发生、发展、耐药等多个过程,并受到多种信号通路的调控。Wnt/β-catenin通路在胰腺癌中异常激活,参与了肿瘤增殖、凋亡、耐药等多个过程。目前尚未见硒在胰腺癌治疗及其具体机制的相关研究。本研究拟探索亚硒酸钠干预胰腺肿瘤后凋亡及自噬的作用及其相互影响,以及发生转换的可能机制。目的1.研究亚硒酸钠诱导胰腺癌细胞发生程序性死亡的作用形式2.研究硒诱导胰腺癌发生凋亡与自噬的相互影响。3.Wnt/β-catenin通路在硒诱导胰腺癌程序性死亡中的作用机制4.研究β-catenin与胰腺癌临床病理特点和预后的关系方法：1.应用CCK8法检测亚硒酸钠对胰腺癌细胞增殖的影响,流式细胞仪和western blot检测亚硒酸钠诱导胰腺癌细胞程序性死亡的具体作用形式,测定胰腺癌细胞经硒诱导后活性氧的改变；2.使用自噬抑制剂、激活剂以及凋亡抑制剂干预硒诱导的胰腺癌细胞,流式细胞仪和western blot检测凋亡及自噬之间的相互影响；3.应用流式细胞仪和western blot检测Wnt/p-catenin信号通路在硒诱导胰腺癌细胞程序性死亡中的改变,过表达β-catenin后检测凋亡与自噬的变化；4.建立裸鼠胰腺癌皮下移植瘤模型,亚硒酸钠干预后观察其对肿瘤生长影响；探讨相关作用机制；5.应用免疫组织化学方法检测胰腺癌组织切片中β-catenin的表达情况,分析β-catenin与胰腺癌临床病理特点和胰腺癌患者的预后关系。结果：1.亚硒酸钠可抑制PANC-1、BxPC-3和Capan-1三株胰腺癌细胞的增殖、诱导其发生凋亡；在凋亡增多同时,PANC-1自噬减弱、BxPC-3和Capan-1自噬增强,效应表现为浓度和时间依赖性；硒诱导后三株细胞内的活性氧均升高。2.自噬抑制剂3-MA、Wortmannin和Bafilomycin A1可抑制PANC-1的自噬促进凋亡；自噬的激活剂Rapamycin可激活PANC-1细胞自噬抑制凋亡；凋亡抑制剂Z-VAD-fink可抑制PANC-1细胞凋亡促进自噬。3.亚硒酸钠诱导PANC-1.BxPC-3和Capan-1后Wnt/β-catenin信号通路发生改变,β-catenin、GSK-3β、Cyclin D1和Akt的表达水平下降；过表达β-catenin后PANC-1凋亡减少,GSK-3β、Cyclin D1和Akt表达上升。4.亚硒酸钠抑制胰腺癌移植瘤生长、诱导其发生凋亡并改变Wnt/β-catenin通路。5.凋亡与自噬关键蛋白β-catenin在人胰腺癌癌组织的细胞浆中高表达;与胰腺癌组织学分级、肿瘤大小、淋巴结转移和TNM分期相关；β-catenin高表达与胰腺癌患者预后不良相关。结论：亚硒酸钠可抑制胰腺癌细胞增殖、诱导凋亡；硒诱导胰腺癌细胞的凋亡和自噬可相互影响；Wnt/β-catenin通路在上述过程中起到重要的作用。亚硒酸钠有可能成为胰腺癌化疗的新策略。

全文目录


中文摘要  4-6
ABSTRACT  6-9
前言  9-12
第一部分 亚硒酸钠诱导胰腺癌细胞发生程序性死亡  12-35
  材料和方法  12-23
  结果  23-31
  讨论  31-34
  结论  34-35
第二部分 亚硒酸钠诱导胰腺癌细胞的凋亡与自噬相互关系  35-47
  材料和方法  35-41
  结果  41-43
  讨论  43-46
  结论  46-47
第三部分 亚硒酸钠诱导胰腺癌凋亡与自噬的作用机制  47-60
  材料和方法  47-53
  结果  53-57
  讨论  57-59
  结论  59-60
第四部分 亚硒酸钠对裸鼠胰腺癌移植瘤的影响  60-72
  材料和方法  60-65
  结果  65-70
  讨论  70-71
  结论  71-72
第五部分 凋亡与自噬关键蛋白β-catenin在胰腺癌中的表达及其与临床病理特点和预后相关性的研究  72-81
  材料和方法  72-76
  结果  76-79
  讨论  79-80
  结论  80-81
全文小结  81-82
攻读学位期间取得的研究成果  82-83
综述1  83-95
综述2  95-99
参考文献  99-108
中英文缩略词表  108-109
致谢  109-110

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 消化系肿瘤 > 胰腺肿瘤
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