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可溶性人类白细胞抗原G作为胚胎发育与着床潜能标志性分子的研究

作　者: 郭新宇
导　师: 姚元庆
学　校:
专　业: 妇产科学
关键词: sHLA-G IVF-ET 电化学发光法 临床妊娠率 胚胎种植率
分类号: R714
类　型: 博士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


研究背景：在体外受精-胚胎移植(IVF-ET)周期中,选择具有着床潜能的胚胎移入患者子宫内是保证妊娠的前提。目前,国内外广泛采取单一的形态学评估方法挑选胚胎,但这种方法预测能力有限,亟需寻找可以更好地预测胚胎着床潜能的无创性指标。近年来众多研究显示胚胎培养上清(ECs)中可溶性人类白细胞抗原G(sHLA-G)的表达与IVF结局具有相关性,有望成为临床选择移植胚胎的无创标志物,但既往研究中检测方法和培养条件多样,各个研究的结果无可比性,这些因素影响sHLA-G的检测及其对结局的预测作用,使其结论存在争议。研究目的：通过一系列研究验证sHLA-G能否作为IVF中胚胎发育与着床潜能的标志性分子,以期为IVF-ET胚胎移植时提供无创性的选择标准,进一步提高IVF临床妊娠率,减少移植胚胎数以降低多胎妊娠的发生,从而改善IVF结局。研究方法：本课题最大限度地标准化sHLA-G检测方法和胚胎培养中的一些重要参数,设计单中心回顾性研究、多中心大样本回顾性研究观察ECs中sHLA-G表达与IVF结局的关系。采用双抗夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测ECs中sHLA-G浓度,测得值高于最低检测浓度定义为sHLA-G阳性胚胎,低于最低检测浓度者定义为阴性胚胎。移植至少一个sHLA-G阳性胚胎的周期为sHLA-G阳性周期,移植胚胎全部为sHLA-G阴性者,定义为sHLA-G阴性周期,比较两组间的临床妊娠率(PR)与胚胎种植率(IR)。进一步设计前瞻性临床对照研究,拟行冻融胚胎移植(FET)患者采用随机原则分为两组,实验组解冻sHLA-G阳性胚胎进行移植,对照组解冻sHLA-G阴性胚胎进行移植,比较两组间PR与IR。在方法学上进行改进,采用电化学发光免疫方法(ECLI)对ECs中sHLA-G进行检测,并应用该方法开展单中心初步临床研究。结果：1.采用ELISA方法检测来自单中心53个ICSI周期的ECs共113份,在至少移植了一个sHLA-G阳性胚胎的sHLA-G阳性周期中,68.4%获得了临床妊娠,移植胚胎全部为sHLA-G阴性的阴性周期PR为39.4%(P<0.05)。sHLA-G阳性周期的IR也高于阴性周期(51.3%vs24.3%,.P<0.05)。2.多中心回顾性研究共检测了全国九家生殖中心924个IVF周期2041份ECs,25.5%(521份)检测到sHLA-G表达。移植胚胎全部为sHLA-G阳性胚胎共87个周期,部分移植sHLA-G阳性胚胎306周期,全部移植sHLA-G阴性胚胎531周期,三组的妊娠率分别为49.4%,55.2%和37.3%,(P<0.05)。两两比较提示前两者PR均高于全部移植sHLA-G阴性者,但两者之间无统计学差异(P>0.05)。前两者IR也高于全部移植sHLA-G阴性胚胎者,分别为30.8%，32.9%和23.0%(P<0.05)。各中心sHLA-G阳性周期PR与IR均高于sHLA-G阴性周期,其中A,C,E三个中心两组间PR与IR的差异均有统计学意义,B中心两组间的PR和H中心两组间IR的差异也有统计学差异。综合九家中心,sHLA-G阳性周期的PR与IR均高于阴性组(53.9%与%32.5vs37.3%与23.0%,P<0.05),而两组间流产率和异位妊娠发生率均无统计学差异(6.6%与2.4%vs6.1%与5.1%,P>0.05)。按受精方式分层分析,IVF组中,sHLA-G阳性周期PR与IR均高于同组的阴性周期(PR：55.0%vs36.1%,IR：33.7%vs22.6%,P<0.05),ICSI组也观察到类似的结果(PR：51.3%vs37.2%,IR：29.4%vs22.6%,P<0.05)；按年龄段分层分析,年龄<35岁组与年龄>35岁组中,sHLA-G阳性周期PR与IR均高于各自的阴性周期(≤35岁组PR：54.6%vs40.0%,IR：34.4%vs25.6%,>35岁组PR：51.2%vs27.4%,IR：26.0%vs14.9%P<0.05)；按培养液体系分层分析,Vitrolife组与Quinn’s组中,sHLA-G阳性周期PR和IR分别为56.4%与33.9%(Vitrolife),54.1%与32.9%(Quinn’s)均高于各自的sHLA-G阴性周期(Vitrolife:41.3%与25.2%,Quinn’s:35.0%和21.4%P<0.05)。全部植入周期的移植胚胎中sHLA-G阳性胚胎占35.6%,高于全部未植入周期移植胚胎中sHLA-G阳性胚胎的百分率19.2%(P<0.05)。ECs中sHLA-G的表达与相应的胚胎评分行Kendall等级相关分析,相关系数tau b=-0.057,P<0.05,提示两者之间无相关关系。妊娠相关因素的Logistic多元回归分析显示进入模型的变量为sHLA-G表达、年龄和获卵数。sHLA-G阳性表达与妊娠结局呈正相关关系,OR值为2.170,P<0.05。3.FET前瞻性研究中,实验组7例患者中6例获得临床妊娠(85.7%),对照组25例中13例获得妊娠(52.0%),两者相比无统计学差异(P>0.05)。实验组IR为55.6%,高于对照组(27.3%)差异有统计学意义(P<0.05)。4.采用在商品化ELISA试剂盒基础上改良的电化学免疫发光检测方法,检测胚胎培养上清sHLA-G敏感度是ELISA的6.28倍,单中心92个IVF周期结果显示sHLA-G阳性周期PR和IR分别为51.9%和31.5%,均高于sHLA-G阴性周期(30%与14.9%,P<0.05)。5.采用人工基因合成技术合成了HLA-G5cDNA序列全长,并成功构建了HLA-G5表达慢病毒载体。结论：胚胎培养上清中sHLA-G的表达可能是胚胎着床与发育潜能的重要标志物,将为IVF胚胎移植时提供无创性的胚胎选择标准。

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中图分类: > 医药、卫生 > 妇产科学 > 产科学
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