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乙醇对H4-IIE细胞PPAR-α、AMPK-α1表达和细胞凋亡的影响

作　者: 金明杰
导　师: 金武丕
学　校: 延边大学
专　业: 急诊医学
关键词: 乙醇 H4-ⅡE肝癌细胞 PPAR AMPK 细胞凋亡
分类号: R575.5
类　型: 硕士论文
年　份: 2013年
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内容摘要

目的：本次试验以大鼠H4-ⅡE细胞作为研究对象,采用含有不同浓度乙醇之细胞培养液进行细胞培养,观察乙醇对H4-ⅡE细胞PPAR-α、AMPK-α1及细胞凋亡的影响。方法：1、大鼠H4-ⅡE细胞以适量浓度接种于培养瓶中,加入DIdEM培养液(含10%胎牛血清、4500mg/L D-葡萄糖、584mg/L L-谷氨酰胺、3700mg/L Na2CO3、青霉素100u/m1、链霉素100μg/ml,pH值7.0-7.4。)置于37℃,5%C02细胞培养箱中培养。每3-5日传代1次,视细胞密度及后续操作需求以1：4-1：12比例传代。分设对照组和实验组,实验组在上述培养液中分别加入乙醇并调定浓度至0.5mol/L、1.0mol/L、1.5mol/L。在培养12小时末进行凋亡检测,在培养12h、24h、48h末进行HE染色和免疫组化染色。2、应用倒置显微镜、HE染色进行形态学观察；免疫组化染色观察PPARβ、AMPKα1在各组细胞内的表达；流式细胞术、Annexin V-FITC/PI双染色、TUNEL染色检测各组细胞凋亡。结果：1、形态学：①倒置显微镜：对照组细胞为梭形,排列密集,体积较大,正常贴壁,胞膜完整,胞质丰富,饱满透亮,分布均匀,核仁大小不一,可见核分裂相；乙醇组细胞数量减少明显,部分明显变圆,凋亡明显增多。②HE染色：对照组细胞呈梭形,细胞排列致密,细胞之间空隙少,细胞体积大,胞浆丰富,胞核染色明显,胞核中可见多个核仁,可有核分裂相；乙醇组细胞排列明显疏松,部分细胞明显变圆,胞浆浓缩,视野中凋亡细胞、颗粒明显比对照组低浓度乙醇组增多。2、流式细胞术：乙醇干预组H4-ⅡE细胞正常活细胞比例较对照组减少(P<0.05),早期凋亡细胞比例增多(P<0.05),晚期凋亡细胞及死亡细胞比例增多(P<0.05)。3、Annexin V-FITC/PI双染色：对照组：使用FITC滤镜(蓝光)观察,极少数细胞可见红色荧光,使用Rhodamine滤镜(绿光)观察,少数细胞可见绿色荧光；乙醇组细胞：使用FITC滤镜观察,可见较多红色荧光,使用Rhodamine滤镜观察,可见较多绿色荧光,视野中细胞皱缩明显,可见较多细胞碎片。4、TUNEL法检测细胞凋亡：对照组细胞呈梭形,大多数细胞呈无色透明,个别细胞胞核呈蓝色；乙醇组细胞排列明显疏松,部分细胞明显变圆,胞核被染色之细胞数量较低浓度乙醇组明显增多(P<0.05)。5、免疫组化染色：①乙醇对大鼠H4-ⅡE细胞PPAR-α表达的影响：与对照组相比,0.5M乙醇处理12h后H4-ⅡE细胞PPAR-α表达无显著改变(P>0.05),其他乙醇组H4-ⅡE细胞PPAR-α表达明显减少(P<0.05)；②乙醇对大鼠H4-ⅡE细胞AMPK-α1表达的影响：与对照组相比,0.5M乙醇处理12h后H4-ⅡE细胞AMPK-α1表达无显著改变(P>0.05),其他乙醇组H4-ⅡE细胞AMPK-α1表达明显减少(P<0.05)。结论：1、乙醇减少肝细胞PPAR-α的表达；2、乙醇减少肝细胞AMPK α1的表达；3、乙醇诱导肝细胞凋亡与PPAR-α的表达下调有关。

全文目录

摘要  6-8
Abstract  8-9
中英文缩略词表  9-12
第一章引言  12-14
第二章材料与方法  14-22
  2.1 实验材料  14-15
  2.2 实验方法  15-22
第三章结果  22-27
  3.1 形态学观察  22-23
  3.2 流式细胞术检测凋亡率  23
  3.3 Annexin V-FITC/PI双染色  23
  3.4 TUNEL检测细胞凋亡  23-24
  3.5 免疫组化染色  24-25
  3.6 PPAR-α与细胞凋亡  25-27
第四章讨论  27-32
  4.1 乙醇诱导H4-ⅡE细胞凋亡  28-29
  4.2 乙醇代谢与PPAR  29-31
  4.3 乙醇代谢与AMPK  31-32
第五章结论  32-33
致谢  33-34
参考文献  34-37
附图  37-45
综述  45-56
  参考文献  53-56

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