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版纳微型猪糖尿病模型建立及其PKB的表达研究

作　者: 王月婷
导　师: 王宗保
学　校: 南华大学
专　业: 生物化学与分子生物学
关键词: 版纳微型猪动物模型糖尿病 PKB 细胞凋亡
分类号: R587.1
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

研究背景与目的糖尿病（DM）是继恶性肿瘤、心脑血管疾病后的第三大非传染性疾病，目前在人群中的发病率呈逐年上升趋势，严重危害着人们的健康与生命。PKB是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，以往的研究表明，它参与机体调节糖、脂代谢，促进细胞生存，抑制细胞凋亡等过程。本论文拟采用高糖高脂和联合注射STZ的方法建立版纳微型猪糖尿病模型，在此基础上，观察肝脏、肾脏、骨骼肌等组织病变与细胞超微结构的改变。研究PKBmRNA在肝脏、肾脏、骨骼肌等组织中的表达，PKB与p-PKB^Ser473蛋白在这些组织中的表达，探讨PKB在糖代谢紊乱与胰岛素抵抗中的作用，为PKB在糖尿病发生、发展中的作用机制提供参考依据。方法8只雄性版纳微型猪按体重随机区组设计分为2组：正常对照组，喂基础猪饲料（control diet， CD）；高糖高脂组，喂高糖高脂饲料（high-sucrose/high-fat diet，HSFD，包含10%的猪油，37%的蔗糖，53%的基础猪饲料）,其中高糖高脂组喂养一周后腹腔注射链脲佐菌素（streptozotocin，STZ），剂量为50mg/Kg，第7个月末，静脉注射STZ，剂量为50mg/Kg，连续注射3次（每天一次），整个建模时间持续12个月。每个月末采集空腹血样，检测葡萄糖（fasting plasma glucose，FPG）、胰岛素（fasting plasma insulin，FINS）、总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）。建模期最后一个月末，进行静脉糖耐量试验（IVGTT）和胰岛素敏感性实验，计算糖耐量指数和胰岛素敏感性指数。建模结束后处死动物，观察胰腺、肝脏、肾脏、骨骼肌等组织的大体形态，HE染色观察胰腺、肝脏、肾脏、骨骼肌等组织的显微结构，透射电镜观察胰腺、肝脏、肾脏等细胞的超微结构。实时荧光定量PCR检测肝脏、肾脏、骨骼肌等组织的PKB mRNA表达，免疫组织化学检测PKB和p-PKB^Ser473在肝脏、肾脏、骨骼肌等组织中的定位及相对表达量，western blot检测PKB和p-PKB^Ser473在胰腺、肝脏、肾脏、骨骼肌等组织中的表达，TUNEL法检测肾脏组织细胞凋亡的情况。结果高糖高脂喂养和联合注射STZ成功建立版纳微型猪糖尿病模型，同时伴随有胰腺、肝脏、肾脏、骨骼肌、脂肪等组织病变。肝脏和肾脏组织的PKBmRNA的表达量相对升高，骨骼肌组织PKB mRNA相对降低；在这些病变组织中总的PKB蛋白水平HSFD组略高于CD组，两组比较不具有显著性意义（P>0.05）；而p-PKB^Ser473蛋白表达水平HSFD组明显低于CD组，两组比较差异具有显著性意义（P<0.05）。结论高糖高脂喂养和联合注射STZ成功建立版纳微型猪糖尿病模型。在版纳微型猪糖尿病模型中，PKBmRNA在肝脏组织和肾脏组织表达显著上调，在骨骼肌组织表达显著下调。总PKB蛋白的表达两组未见显著性差异，p-PKB^Ser473表达显著下调。

全文目录

主要英文缩略语  4-5
中文摘要  5-7
ABSTRACT  7-9
引言  9-11
材料与方法  11-17
  1.实验试剂与仪器  11-12
  2.实验方法  12-17
结果  17-36
  1.建立版纳微型猪糖尿病模型  17-22
  2.版纳微型猪组织病变  22-36
讨论  36-41
  1. 高糖高脂喂养和联合注射 STZ 建立版纳微型猪糖尿病模型  36-38
  2.PKB 在胰岛素抵抗与糖代谢紊乱中的作用  38-39
  3.细胞凋亡参与肾脏损伤的发生  39-41
结论  41-42
参考文献  42-47
文献综述  47-55
  参考文献  52-55
攻读硕士期间的成绩  55-56
致谢  56

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