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巴豆生物碱的提取及提高药材质量标准研究

作　者: 李生梅
导　师: 林吉
学　校: 广州中医药大学
专　业: 中药学
关键词: 巴豆巴豆生物碱木兰花碱酸性染料比色法分离纯化
分类号: R284
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要

巴豆是我国有着悠久用药历史的一味有毒中药,中医理论强调以偏制偏,用药物的偏性制约人之偏性,巴豆至今在治疗一些顽症和难症方面仍有不可替代的作用。近年来越来越多的学者开始关注巴豆生物碱这个活性部位,文献研究也证实了其对多种癌细胞和肿瘤细胞均有良好的抑制作用,值得进一步深入研究和开发。分离纯化一直是中药研究的“瓶颈”,由于对巴豆生物碱化学成分了解不多,所以对其的研究一直停留在一个“黑匣子”阶段。而中药现代化和进一步对巴豆生物碱开发利用,化须打开这个“黑匣子”,了解巴豆生物碱的相关信息,如化学成分特性、有代表性的化学成分、巴豆生物碱的含量等。以提高中药材的质量可控性,健全质量标准等。因此,本论文对巴豆生物碱的提取及提高其质量标准进行研究。目的：(1)巴豆生物碱对照品的提取和结构鉴定；(2)巴豆苷的提取纯化研究；(3)木兰花碱的提取纯化研究；(4)巴豆生物碱的薄层色谱图：(5)巴豆生物碱含量测定；(6)高效液相色谱法同时测定木兰花碱和巴豆苷含量。方法：(1)预试验了解巴豆生物碱溶解特性,确定提取路线；运用大孔树脂纯化技术和高效制备液相技术分离巴豆生物碱化学成分；对化学成分运用化学和波谱方法鉴定其结构。(2)以巴豆苷的含量为指标,对巴豆中巴豆苷的提取和纯化条件进行考察,筛选出较优工艺条件。(3)以木兰花碱的含量为指标,对巴豆中木兰花碱的提取和纯化条件进行考察,筛选出出较优工艺条件。(4)以巴豆苷和木兰花碱为对照品,建立巴豆生物碱TLC鉴别方法。(5)以木兰花碱为对照品,运用酸性染料法,进行巴豆生物碱含量测定,以木兰花碱计,计算巴豆生物碱含量。(6)采用高效液相色谱法同时测定巴豆中巴豆苷和木兰花碱含量的分析方法。结果：(1)从巴豆生物碱部位分离得到两个化合物,化合物Ⅰ经鉴定为巴豆苷,属于结合型生物碱；化合物H为木兰花碱,属于游离型生物碱,木兰花碱首次从巴豆Croton tigliuw L中分离得到。(2)正交设计法优选出巴豆苷较佳提取条件：用8倍量20%乙醇回流提取提取3次,每次40min。优选纯化条件为：优选出D101树脂,上样药材用量与树脂的比为3.5：1,树脂径高比1：9,上样液浓度1.5g生药·ml-1,上样液流速1.0BV·h,8%乙醇冲洗。(3)木兰花碱较佳提取条件：用10倍量30%乙醇回流提取2次,每次40min,即可得到木兰花碱粗提物。优选纯化条件为：优选出D101树脂,药材量：树脂量为6：1,上样液浓度1.5g生药·ml-1,吸附半小时后以1.5BV·h-1流速洗脱,4BV水除去不吸附的物质、8%乙醇洗脱其它成分,再用4BV30%乙醇冲洗柱体积,收集目标成分。(4)以巴豆供试品溶液、巴豆苷对照品溶液、木兰花碱对照品溶液,分别点于同一硅胶H薄层板上,以氯仿-甲醇-水(6：5：1,加5滴氨水)的展开系统展开,碘熏显色,在日光下检视,与两对照品相应位置上,应显山相同颜色的斑点。(5)酸性染料法的测定条件为：巴豆供试品1ml,加pH6.0缓冲液至8mL,加溴麝香草酚蓝3.5mL,振摇3min,静置40min,三氯甲烷8mL萃取,测定波长为420nm,在0.0246～0.1473mg范围内线性关系良好(r=0.9995),平均回收率99.0%,RSD为2.74%。(6)高效液相色谱法同时测定木兰花碱和巴豆苷含量,结果木兰花碱在0.098～1.223μg范围内线性关系良好(r=0.9997),平均加样回收率为99.20%,RSD=2.91%(n=6)；巴豆苷在0.604～9.06μ g范围内线性关系良好(r=0.9998),平均加样回收率为100.91%,RSD=2.39%(n=6)。结论：从巴豆生物碱中分离得到两个化合物,一个为结合型巴豆生物碱巴豆苷;另个为游离型巴豆生物碱木兰花碱,其中木兰花碱为首次从巴豆Croton tiglium L.中分离得到。对巴豆苷和木兰花碱的提取和纯化工艺进行了考察,为制备较纯巴豆苷和木兰花碱提供参考,以便进一步开展相关研究。在提高巴豆药材质量方面,通过建立巴豆生物碱簿层色谱条件,完善巴豆药材的不同部位的薄层鉴别方法：建立了酸性染料法巴豆生物碱含量测定方法,及高效液相同时测定巴豆苷和木兰花碱含量测定方法,健全了巴豆含量测定的方法。

全文目录

摘要  3-5
Abstract  5-10
引言  10-11
第一部分文献研究  11-33
  第1节巴豆研究概况  11-19
    1 历史沿革  11
    2 巴豆属药源与产地  11-14
    3 巴豆加工炮制研究  14
    4 化学成分  14-16
    5 药理作用  16-17
    6 毒性毒理  17-19
  第2节巴豆生物碱药理活性研究进展  19-22
  第3节巴豆药材的质量标准研究概述  22-25
    1 性状  22
    2 鉴别  22
    3 检查  22-23
    4 含量测定  23-25
  第4节大孔树脂在中药分离纯化中的应用  25-31
  第5节小结  31-33
第二部分试验研究  33-86
  第一章巴豆生物碱的提取分离及纯化工艺研究  33-58
    第1节巴豆生物碱对照品的分离及结构鉴定  33-44
      1 试药与仪器  33-34
      2 方法与结果  34-40
      3 结构鉴定  40-43
      4 实验小结  43-44
    第2节巴豆苷提取纯化工艺研究  44-48
      1 试药与仪器  44
      2 正交设计优选提取工艺  44-46
      3 大孔树脂纯化研究  46-47
      4 小结  47-48
    第3节木兰花碱的提取纯化工艺研究  48-58
      1 试药与仪器  48
      2 木兰花碱的提取工艺研究  48-52
      3 木兰花碱的纯化工艺研究  52-56
        3.1 溶液的制备  52
        3.2 工艺条件与参数优化  52-56
        3.3 验证试验  56
      4 小结  56-58
  第二章提高巴豆药材质量标准研究  58-86
    第1节巴豆生物碱TLC薄层色谱  58-62
      1 试药及仪器  58-59
      2 方法与结果  59-60
      3 小结  60-62
    第2节酸性染料比色法测定巴豆生物碱的含量  62-70
      1 试药与仪器  62
      2 方法与结果  62-67
      3 实验小结  67-70
    第3节高效液相法同时测定巴豆苷和木兰花碱的含量  70-86
      1 试药与仪器  70-71
      2. 供试品溶液制备  71
      3 对照品溶液的配制  71-72
      4 色谱条件的筛选  72-74
      5 方法学考察  74-82
      6 样品含量测定  82-84
      7 实验小结  84-86
第三部分结语  86-89
  1 结论  86-87
  2. 创新性  87
  3. 展望  87-89
参考文献  89-93
附录  93-101
研究生发表论文情况  101-102
硕士期间参与研究课题  102-103
致谢  103

巴豆生物碱的提取及提高药材质量标准研究

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