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TGF-β_1和bFGF对奶牛乳腺细胞增殖和凋亡的影响

作　者: 李瑜
导　师: 王凤龙
学　校: 内蒙古农业大学
专　业: 基础兽医学
关键词: 奶牛 乳腺 上皮细胞 成纤维细胞 转化生长因子-β1 碱性成纤维细胞生长因子 细胞增殖 细胞凋亡
分类号: S823
类　型: 硕士论文
年　份: 2012年
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内容摘要


目的：培养、纯化奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞,倒置显微镜观察和绘制细胞生长曲线,了解体外培养细胞的生物学特性,探讨转化生长因子-β1(Transfer gowth factor-β1,TGF-β1)和碱性成纤维细胞生长因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)对奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞增殖和凋亡的影响,以阐明两种细胞因子对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞的影响。方法：采用组织块培养法进行奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞的原代培养。根据上皮细胞和成纤维细胞贴壁程度不同,利用差时胰酶消化法和差速贴壁法纯化奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞。倒置相差显微镜下观察细胞形态和鉴定细胞的来源。传至六代纯化的细胞用于实验。实验分别检测两种细胞因子TGF-β1、bFGF对纯化的奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞的影响。结果：(1)显微镜观察及生长曲线结果显示,体外培养和纯化的奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞具有典型的形态特征且具有良好的增殖能力。(2)MTT比色法检测结果显示：在奶牛乳腺上皮细胞中不同浓度TGF-β1实验组与对照组比较差异显著,随TGF-β1浓度增大抑制细胞增殖作用增强；奶牛乳腺成纤维细胞中不同浓度TGF-β1实验组与对照组比较差异显著,随TGF-β1浓度增大促进细胞增殖作用增强；在奶牛乳腺上皮细胞中不同浓度bFGF实验组与对照组比较差异不显著；奶牛乳腺成纤维细胞中不同浓度bFGF实验组与对照组比较差异显著,随bFGF浓度增大促进细胞增殖作用增强；(3)应用分光度法检测caspase-3活性,测定DNA片段化率检测结果显示：在奶牛乳腺上皮细胞中不同浓度TGF-β1实验组与对照组比较差异显著,随TGF-β1浓度增大促进细胞凋亡作用增强；在奶牛乳腺成纤维细胞中结果显示不同浓度TGF-β1实验组与对照组之间差异显著,随TGF-β1浓度增大抑制细胞凋亡作用增强；应用分光度法检测caspase-3活性、测定DNA片段化率检测结果显示：在奶牛乳腺上皮细胞中不同浓度bFGF实验组与对照组比较差异不显著；在奶牛乳腺纤维细胞中结果显示不同浓度bFGF实验组与对照组之间差异显著,随bFGF浓度增大抑制细胞凋亡作用增强。结论：TGF-β1可以抑制奶牛乳腺上皮细胞的增殖和促进奶牛乳腺上皮细胞凋亡；可以促进奶牛乳腺成纤维细胞的增殖和抑制奶牛乳腺成纤维细胞凋亡。bFGF在奶牛乳腺上皮细胞的增殖和奶牛乳腺上皮细胞凋亡方面作用不明显；可以促进奶牛乳腺成纤维细胞的增殖和抑制奶牛乳腺成纤维细胞凋亡。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-10
1 引言  10-18
  1.1 奶牛乳腺的结构和泌乳功能  10
  1.2 乳腺细胞  10-11
    1.2.1 乳腺细胞学  10
    1.2.2 乳腺上皮细胞研究历史  10-11
  1.3 乳腺发育和乳腺的退化期  11-12
  1.4 退化期乳腺细胞凋亡  12-13
    1.4.1 内分泌调节  12
    1.4.2 局部机械调节  12
    1.4.3 内分泌与局部调节因子对退化期乳腺细胞凋亡的协同调节  12-13
  1.5 退化期乳腺细胞凋亡的调节因子及信号途径  13
  1.6 bFGF功能  13-15
    1.6.1 bFGF概述  13-14
    1.6.2 bFGF生物学效应  14
    1.6.3 bFGF作用机制  14
    1.6.4 bFGF在乳腺组织中的作用  14-15
  1.7 TGF功能  15-17
    1.7.1 TGF概述  15
    1.7.2 TGF-β_1对青春期乳腺调节功能  15-16
    1.7.3 TGF-β的作用机制  16
    1.7.4 TGF-β_1在退化期乳腺内功能  16-17
  1.8 细胞凋亡  17-18
    1.8.1 细胞凋亡的概况  17
    1.8.2 细胞凋亡的机制  17-18
    1.8.3 细胞增殖的检测方法  18
    1.8.4 细胞凋亡检测方法  18
2 材料与方法  18-22
  2.1 材料  18-20
    2.1.1 奶牛乳腺组织  18-19
    2.1.2 试剂与药品  19
    2.1.3 主要仪器  19-20
  2.2 方法  20-22
    2.2.1 奶牛乳腺细胞原代培养、纯化、冻存和复苏培养  20
    2.2.2 纯化奶牛乳腺上皮细胞和成纤维细胞的形态学观察及其生长曲线绘制  20-21
    2.2.3 奶牛乳腺细胞的处理  21
    2.2.4 检测TGF-β_1、bFGF对奶牛乳腺细胞增殖的影响  21
    2.2.5 检测TGF-β_1、bFGF对奶牛乳腺细胞凋亡的影响  21-22
    2.2.6 数据分析方法  22
3 结果  22-37
  3.1 奶牛乳腺细胞的培养、纯化、冻存和复苏结果  22-23
  3.2 细胞生长曲线绘制  23-25
  3.3 TGF-β_1、bFGF对奶牛乳腺细胞增殖的影响  25-29
    3.3.1 TGF-β_1对奶牛乳腺细胞增殖的影响  25-27
    3.3.2 bFGF对奶牛乳腺细胞增殖的影响  27-29
  3.4 TGF-β_1、bFGF对奶牛乳腺细胞凋亡的影响  29-37
    3.4.1 TGF-β_1对奶牛乳腺细胞caspase-3活性的影响  29-31
    3.4.2 bFGF对奶牛乳腺细胞caspase-3活性的影响  31-33
    3.4.3 TGF-β_1对奶牛乳腺细胞DNA片段化率的影响  33-35
    3.4.4 bFGF对奶牛乳腺细胞DNA片段化率的影响  35-37
4 讨论  37-38
5 结论  38-39
致谢  39-40
参考文献  40-46
作者简介  46

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中图分类: > 农业科学 > 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂 > 家畜 > 牛
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