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甲羟戊酸对人系膜细胞增殖的影响及机制研究

作　者: 王利华
导　师: 李荣山
学　校: 山西医科大学
专　业: 内科学
关键词: 甲羟戊酸 系膜细胞 细胞外基质 细胞增殖 细胞凋亡 丝裂原活化蛋白激酶
分类号: R692.3
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


研究背景系膜增生性肾炎是我国最常见的原发性肾小球疾病之一，其主要病理表现为系膜细胞（MC）增殖和细胞外基质（ECM）聚集。MC是肾小球内活跃的固有细胞，在肾小球损伤时，MC增生活跃而凋亡受阻，增生的MC能分泌转化生长因子β1（TGF-β1）等多功能细胞因子，后者调节细胞的增殖和分化，刺激ECM[包括正常存在的胶原成分如Ⅳ型胶原（Col-Ⅳ）和间质胶原如Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）]的合成，最终导致肾小球硬化，直至终末期肾衰竭。因此抑制MC增殖及ECM积聚一直受到广泛关注，特别是关于细胞外各种有害刺激通过怎样的信号转导通路引起MC的增殖及ECM分泌的机制是近年的研究热点。细胞的过度增殖往往伴有凋亡受阻，研究发现Bcl-2家族的表达和调控是影响细胞凋亡的关键因素之一，在细胞凋亡信号转导途径中发挥重要作用。Bcl-2和Bax分别是Bcl-2家族中最具代表性的抑制凋亡和促进凋亡蛋白，二者的比值决定细胞是否发生凋亡，且与肾脏细胞的凋亡密切相关。研究发现，羟甲基戊二酰辅酶A（HMG-CoA）还原酶抑制剂抑制MC增殖的作用是通过阻断细胞内甲羟戊酸（MVA）代谢途径而产生的非依赖于降血脂的多效性作用实现的，这些作用与细胞增殖、信号转导、凋亡等密切相关，并可能与丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）信号转导通路的激活有关。已知的MAPKs信号转导通路包括四个亚族，其中细胞外信号调控蛋白激酶（ERK）、c-JUN氨基末端激酶（JNK）／应激激活的蛋白激酶（SAPK）和P38蛋白激酶（P38MAPK）介导了MC增殖与ECM分泌，与系膜增生性肾炎的发生、发展密切相关。MVA对MC的影响及其机制如何?MVA对MC ERK、JNK、P38MAPK通路及下游核内转录因子的影响如何?三条通路作用的相互关系如何?目前未见相关报道。目的观察MVA对人类肾小球系膜细胞（HMC）增殖、ECM产生、细胞周期、细胞凋亡的影响，及其与TGF-β1和MAPKs信号转导通路的关系，探讨MVA对HMC的作用及其机制。方法1．HMC随机分为8组，对照组及MVA不同浓度组(1×10-9mol／L、1×10-8mol／L，1×10-7mol／L、1×10-6mol／L、1×10-5mol／L、1×10-4mol／L、1×10-3mol／L)，应用MTT法检测活细胞数目及流式细胞术检测细胞增殖指数（PI）。2．HMC随机分为对照组和MVA组(MVA浓度根据前期实验选择1×10-7mol／L)，各组分别取12、24、48 h 3个时间点收集细胞，应用MTT法及流式细胞术检测活细胞数目、PI及细胞凋亡；ELISA法检测培养的细胞上清液中TGF-β1、Col-Ⅳ和Col-Ⅰ的含量；Western blotting法检测Bcl-2、Bax蛋白质表达。3．HMC随机分为8组，对照组、PD98059（ERK抑制剂）组、SP600125（JNK抑制剂）组、SB203580（P38抑制剂）组、MVA组、MVA+PD98059组、MVA+SP600125组、MVA+SB203580组，于12 h收集细胞，观察特异性的抑制各通路的激活后，前述指标的变化。4．HMC随机分为3大组，每大组分为4小组：A：对照组、SB203580组、MVA组、MVA+SB203580组；B：对照组、MVA组、SP600125组、MVA+SP600125组；C：对照组、PD98059组、MVA组、MVA+PD98059组，于12 h收集细胞，Western blotting法检测p-ERK1／2、p-JNK、p-P38蛋白的表达。结果1．MVA在一定浓度范围(1×10-9-1×10-7mol／L)和时间（12-48 h）内可促进体外培养的HMC增殖并促进细胞周期进展，以1×10-7mol／L作用最明显；2．1×10-7Tmol／L的MVA可诱导HMC增殖；PI升高；TGF-β1表达增加；Col-Ⅳ和CoI-Ⅰ产生增加；细胞凋亡减少；Bcl-2／Bax比值增加：3．MVA可使磷酸化的ERK和JNK表达明显增加，ERK特异性抑制剂PD98059及JNK特异性抑制剂SP600125可部分或完全阻断MVA所致的HMC增殖、ECM沉积及细胞凋亡减少，但p38通路特异性阻滞剂SB203580对上述作用无明显影响，MAV对1938的磷酸化也无影响。结论MVA在一定浓度范围和时间可诱导HMC增殖及ECM沉积，该作用至少部分是通过TGF-β1家族的促增殖和Bcl-2家族抑制凋亡的作用而实现的，其信号转导与MAPKs信号转导通路中的JNK和ERK亚族的活化有关。

全文目录


中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
正文  9-57
  前言  9-11
  实验研究一 甲羟戊酸对人类肾小球系膜细胞增殖的影响  11-19
    引言  11
    材料  11-12
    方法  12-13
    结果  13-16
    讨论  16-17
    小结  17
    参考文献  17-19
  实验研究二 甲羟戊酸诱导人系膜细胞增殖的机制研究  19-35
    引言  19
    材料  19-20
    方法  20-23
    结果  23-30
    讨论  30-33
    小结  33
    参考文献  33-35
  实验研究三 MAPKs在甲羟戊酸诱导人系膜细胞增殖中的作用  35-57
    引言  35-36
    材料  36-37
    方法  37-40
    结果  40-51
    讨论  51-54
    小结  54
    参考文献  54-57
全文总结  57-58
综述  58-66
英文缩略词表  66-68
个人简介  68-69
致谢  69

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中图分类: > 医药、卫生 > 外科学 > 泌尿科学（泌尿生殖系疾病） > 肾疾病 > 肾炎
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