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雷公藤内酯醇对小鼠前列腺癌作用及其机制的研究

作　者: 张瑞
导　师: 张琪
学　校: 黑龙江中医药大学
专　业: 中医内科学
关键词: 雷公藤内酯醇 前列腺癌 凋亡 caspase-3 bcl-2
分类号: R285.5
类　型: 博士论文
年　份: 2007年
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内容摘要


目的：本实验在应用导师经验方治疗前列腺癌取得较好临床效果基础上，通过体内、体外实验，探讨方中有效抗癌成分雷公藤内酯醇对小鼠前列腺癌细胞株RM-1和小鼠前列腺癌模型的增殖抑制作用及其可能机制，以期为临床提供安全有效的抗前列腺癌药物。方法：体外实验采用小鼠前列腺癌RM-1传代细胞，用MTT实验检测TL对RM-1细胞的增殖抑制作用；用吖啶橙荧光染色检测TL对RM-1凋亡细胞形态学影响；用流式细胞术分析TL对RM-1细胞周期及凋亡峰的作用；用梯状电泳方法检测TL对RM-1细胞DNA的凋亡作用；用RT-PCR法检测TL对RM-1细胞caspase-3、bcl-2 mRNA表达水平的影响。体内实验采用C57BL／6小鼠皮下注射RM-1细胞，建立前列腺癌动物模型，检测肿瘤体积和重量计算肿瘤生长抑制率；TUNEL技术检测前列腺癌组织中凋亡细胞；免疫组化检测方法观察药物对实验动物肿瘤组织caspase-3基因及其蛋白bcl-2表达水平的影响。结果：1．TL（5、10、20、40、80 ng／ml）处理后RM-1细胞生长抑制率分别为9.8％、25.1％、39.2％、48.8％、53.2％，以TL（10、20 ng／ml）处理RM-1细胞12、24、36、48h后，细胞生长抑制率分别为8.4％、25.1％、36.1％、42.4％和10.2％、39.2％、50.2％、58.5％，MTT检测显示雷公藤内酯醇呈剂量和时间依赖性抑制RM-1细胞的生长。2．前列腺癌小鼠模型建立14d后，TL（0.2mg／kg）、TL（0.4mg／kg）、TL（0.8／g／kg）组小鼠肿瘤生长较慢，瘤重与模型对照组比较差异显著（P＜0.01）。体内实验结果显示一定浓度TL能抑制小鼠体内前列腺癌细胞生长。3．吖啶橙荧光染色观察显示，经TL处理RM-1细胞核浓缩，细胞膜内陷、胞内有不规则橘黄色颗粒，呈凋亡样形态学改变。4．流式细胞术分析细胞周期及凋亡峰，结果显示TL（10、20ng／ml）作用RM-1细胞48h后，在G1期前出现明显的凋亡峰，凋亡率分别为41.1％和57.8％。5．DNA电泳分析表明，TL处理24h、36h、48h各组均可见DNA“梯形”图谱，48h作用细胞DNA“梯形”条带尤为明显。6．TUNEL染色结果显示，前列腺癌动物模型经TL给药后，TUNEL染色阳性细胞增多，其核内有棕黄颗粒-凋亡小体，呈小圆形，核浓缩、大量微核体的形成。实验表明TL具有诱导前列腺癌细胞凋亡的作用。7．RT-PCR检测显示，TL处理RM-1细胞caspase-3 mRNA表达高于未处理对照细胞，提示药物能通过提高caspase-3表达诱导细胞凋亡。而bcl-2 mRNA表达低于未处理对照细胞，提示药物能通过降低bcl-2表达诱导细胞凋亡。8．免疫组化结果显示，给予TL处理小鼠前列腺癌组织中caspase-3蛋白表达阳性细胞明显高于模型对照组，提示药物能通过提高caspase-3表达诱导细胞凋亡。而bcl-2蛋白阳性细胞表达明显低于模型对照组，进一步提示药物能降低bcl-2蛋白表达，而且bcl-2蛋白也与前列腺癌细胞分化程度有关。结论：1．TL抑制小鼠前列腺癌细胞株RM-1增殖，并呈一定的时间和剂量依赖性。2．TL抑制小鼠体内前列腺癌细胞生长。3．TL诱导RM-1细胞凋亡。4．TL诱导小鼠体内前列腺癌细胞凋亡。5．TL抑制肿瘤增长作用是通过诱导细胞凋亡实现的。6．TL提高RM-1细胞caspase-3并降低bcl-2mRNA表达。7．TL提高小鼠体内前列腺癌细胞caspase-3并降低bcl-2蛋白表达。8．TL通过增加caspase-3表达并降低bcl-2表达诱导前列腺癌细胞凋亡。

全文目录


英文缩略语表  5-6
中文摘要  6-9
Abstract  9-13
引言  13-15
第一篇 文献回顾  15-50
  1.前列腺癌的西医学治疗概况  15-39
    1.1 待机处理  15
    1.2 内分泌治疗  15-34
    1.3 化学治疗  34
    1.4 放射治疗  34-37
    1.5 冷冻外科消融  37
    1.6 外科手术治疗  37-38
    1.7 其它治疗  38-39
  2.前列腺癌的中医药治疗近况  39-42
    2.1 病因病机研究  39
    2.2 临床研究  39-41
    2.3 实验研究  41-42
  3.雷公藤内酯醇的药理学研究进展  42-46
    3.1 抗肿瘤作用  42-43
    3.2 降低肾小球肾炎患者尿蛋白水平作用  43-44
    3.3 抗移植排斥反应  44
    3.4 防治动脉粥样硬化作用  44-45
    3.5 抗支气管哮喘作用  45-46
  4.细胞凋亡研究进展  46-50
    4.1 概述  46-47
    4.2 凋亡细胞的形态学和生物化学变化  47-48
    4.3 细胞凋亡的分子调控  48-50
第二篇 基础研究  50-62
  技术路线  50-51
  材料与方法  51-59
    1.材料  51-53
      1.1 主要仪器  51
      1.2 实验动物及细胞  51-52
      1.3 主要试剂  52
      1.4 试剂配制  52-53
    2.主要实验方法  53-58
      2.1 细胞培养与增殖检测  53-54
      2.2 吖啶橙染色检测凋亡细胞  54
      2.3 流式细胞术(Flow cytometry)检测细胞周期及凋亡峰  54-55
      2.4 梯状电泳方法检测凋亡细胞  55
      2.5 RT-PCR检测bcl-2和caspase-3mRNA的表达  55-56
      2.6 实验分组和制备病理模型  56
      2.7 TUNEL技术检测前列腺癌组织中凋亡细胞  56-57
      2.8 bcl-2和caspase-3的免疫组织化学染色  57-58
    3.数据统计  58-59
  结果  59-62
    1.TL对RM-1细胞生长的抑制作用  59
    2.荧光显微镜观察TL处理RM-1细胞形态学变化  59
    3.流式细胞仪检测TL对RM-1细胞凋亡的影响  59
    4.TL作用RM-1细胞的DNA电泳分析  59-60
    5.TL对RM-1细胞内caspase-3基因mRNA的表达的影响  60
    6.TL对RM-1细胞内bcl-2基因mRNA的表达的影响  60
    7.TL对C57BL/6荷瘤小鼠的体重的影响及其抑瘤率  60
    8.TUNEL染色观察TL对前列腺癌细胞凋亡的影响  60
    9.TL对小鼠前列腺癌组织内caspase-3蛋白表达的影响  60-61
    10.TL对小鼠前列腺癌组织内bcl-2蛋白表达的影响  61-62
第三篇 讨论  62-72
  1.TL抑制RM-1细胞增殖  62-63
  2.TL诱导RM-1细胞的凋亡形态学变化  63-64
  3.TL诱导RM-1细胞凋亡  64-65
  4.TL抑制小鼠体内前列腺癌细胞的生长  65-66
  5.TL诱导小鼠体内前列腺癌细胞凋亡  66-68
  6 TL诱导前列腺癌细胞凋亡机制  68-72
结论  72-73
致谢  73-74
参考文献  74-81
附录  81-90
个人简历  90-92
攻读博、硕士学位期间发表的论文  92-93
附：论著  93-105

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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药药理学 > 中药实验药理
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