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氯通道在SIN-1诱导培养大鼠海马神经元凋亡中的作用

作　者: 常全忠
导　师: 高天明
学　校: 第一军医大学
专　业: 神经生物学
关键词: SIN-1 氯通道海马神经元凋亡全细胞记录细胞生存率
分类号: Q42
类　型: 博士论文
年　份: 2006年
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内容摘要

各种因素诱导神经元的凋亡有多方面机制，包括兴奋毒性学说、离子紊乱学说、氧化应激学说和基因调节学说等。在凋亡产生机制的离子因素以往研究中，主要是对Ca²⁺、K⁺和Na⁺离子活动的关注，氯离子的活动多年来未引起重视。一氧化氮（NO）是一种重要的信号转导分子，参与脑内许多生理和病理过程。大量证据表明，缺血性脑损伤后脑内大量产生NO，过量的NO能对脑细胞产生神经损伤作用，能诱导神经细胞凋亡。本研究以培养12天的SD大鼠海马神经元为研究对象，模拟脑缺血的产生机制，利用NO供体SIN-1诱导离体海马神经元凋亡的模型，通过对细生存率、细胞的免疫荧光染色和凋亡细胞记数、Western blot检测凋亡相关蛋白（caspase-3）和膜片钳全细胞记录氯通道电流等方法观察了氯通道在海马神经元凋亡中的作用，试图探讨氯通道在缺血性脑损伤中的作用。一、SIN-1诱导离体海马神经元凋亡模型的建立按培养神经元的方法，用Neurobasal培养基培养的正常12天的SD大鼠海马神经元，光学显微镜下观察显示：正常神经元胞体饱满、光滑，呈锥体形或卵圆形，突起交叉成网；对神经元进行硫堇染色，在膜内侧和胞核的边缘可以清晰的显示尼氏小体，进一步确定本实验常规培养的细胞为神经元；用DNA荧光试剂Hoechst33258和神经元特意性抗体抗-NeuN对神经元双染色，结果发现

全文目录

摘要(中文)  3-10
Abstract(in English)  10-19
1.前言  19-24
2.材料和方法  24-38
  2.1 主要试剂  24-25
  2.2 主要仪器  25-26
  2.3 主要溶液和试剂的配制  26-31
  2.4 主要技术操作  31-37
    2.4.1 海马神经元的培养、鉴定和CIC-2／CIC-3的染色  31-32
    2.4.2 神经元凋亡模型的建立  32-34
    2.4.3 膜片钳实验  34-37
  2.5 统计学方法  37-38
3.实验结果  38-62
4.讨论  62-66
5.结论  66-67
6.参考文献  67-74
7.综述  74-80
发表论文情况  80-96
致谢  96-97
原创性声明及版权使用授权说明  97

氯通道在SIN-1诱导培养大鼠海马神经元凋亡中的作用

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