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NOK高表达肺腺癌细胞系的建立及其相关生物学特性研究

作　者: 陈鹏
导　师: 李小飞；张志培
学　校: 第四军医大学
专　业: 外科学
关键词: 肺肿瘤 NOK 增殖凋亡迁移侵袭
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要

研究背景:受体型酪氨酸蛋白激酶(RPTKs)在调节细胞的迁移、增殖、凋亡等一系列生理、生化过程中发挥着重要作用。2004年,刘力等报道了一个新的RPTK分子并命名为Novel Oncogene with Kinase-domain(NOK),该分子能够诱导肿瘤的发生及转移。临床研究发现,NOK在肺癌组织中存在高表达,且表达的高低和恶性程度相关,提示其可能参与了肺癌的发生、发展过程。但NOK对肺癌细胞生物学特性的影响及作用机制目前尚无报道。目的:建立稳定高表达NOK蛋白的A549-NOK细胞系,观察NOK对A549细胞增殖、凋亡、侵袭和转移的影响,进一步揭示NOK的生物学功能并为研究其作用机制及信号通路提供研究平台。方法:运用电穿孔仪将含NOK全长基因的重组真核表达质粒(pcDNA3.1/NOK)转染入肺腺癌细胞株A549,稳定筛选出的单克隆株命名为A549-NOK细胞,并用RT-PCR和Western blot法对其进行验证。通过流式细胞术检测细胞周期、凋亡;MTT法绘制细胞生长曲线;划痕试验、细胞Transwell迁移试验检测转染前后细胞的迁移能力;细胞Matrigel侵袭试验检测细胞的侵袭能力。结果:RT-PCR及Western blot证明A549-NOK细胞中目的基因稳定高表达。流式细胞术证明A549-NOK与A549、空质粒对照组相比,S期细胞增多(51.7±2.2 vs 43.4±1.5、45.7±1.4,均P<0.05),细胞增殖指数升高(69.4±1.1 vs 58.4±1.3、57.9±1.4,均P<0.05),细胞凋亡比例减少(3.3%±0.7 vs 9.5%±0.8、11.8%±1.2,均P<0.05);MTT结果显示A549-NOK细胞较A549和空质粒对照组细胞生长曲线上移;划痕试验显示A549-NOK细胞的迁移速度加快;Transwell迁移试验中A549-NOK组的穿膜细胞数较A549及空质粒对照组增多(95.7±9.5 vs 69.1±8.3、70.5±7.5,均P<0.05);Matrigel侵袭试验中A549-NOK组的穿膜细胞数较A549及空质粒对照组增多(67.8±6.7 vs 36.0±4.1、38.3±5.1,均P<0.05)。结论:NOK高表达细胞系构建成功,为下一步实验奠定了良好基础;NOK可提高A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制A549细胞的凋亡,可能在肺癌的发生、发展中发挥重要作用。

全文目录

缩略语表  5-6
中文摘要  6-8
英文摘要  8-11
前言  11-12
文献回顾  12-24
  1 受体型酪氨酸激酶  12-14
  2 EGFR  14-17
  3 NOK  17-24
实验一 NOK 高表达细胞细胞系的建立及鉴定  24-31
  1 材料  24-25
  2 方法  25-27
  3 结果  27-29
  4 讨论  29-31
实验二 NOK 对A549 细胞增殖和凋亡的影响  31-37
  1 实验材料  31
  2 方法  31-32
  3 结果  32-35
  4 讨论  35-37
实验三 NOK 对A549 细胞迁移和侵袭的影响  37-42
  1 实验材料  37
  2 方法  37-38
  3 结果  38-40
  4 讨论  40-42
小结  42-44
参考文献  44-54
个人简历和研究成果  54-55
致谢  55

NOK高表达肺腺癌细胞系的建立及其相关生物学特性研究

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