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蒲葵子活性成分及质量控制研究
作 者: 陈艳
导 师: 林新华
学 校: 福建医科大学
专 业: 药理学
关键词: 蒲葵子 生药学 抗肿瘤活性 抗氧化活性 化学成分 药代动力学 质量控制
分类号: R284.1
类 型: 博士论文
年 份: 2011年
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内容摘要
癌症严重威胁着人类的健康和生命安全,目前发病率和死亡率均呈逐年上升趋势。因此,研究高效、低毒的抗癌药物具有重要意义,而从天然药物中发掘抗癌药物正是目前研究热点之一。蒲葵子为棕榈科植物蒲葵Livistona chinensis (Jacq.) R. Br.的种子,福建民间广泛用其治疗各种癌症,现代药理学研究也证实其抗癌疗效显著。然而,对蒲葵子的研究较少,仅见化学成分、粗提物的抗癌活性研究。因此,有必要对蒲葵子进行深入的药学相关研究,为其抗癌药用开发提供基础和依据。鉴于此,本文首先进行蒲葵子的生药学研究;研究各提取部位、组分的抗癌活性;采用HPLC-DPPH法研究蒲葵子提取物的抗氧化活性,筛选其中的高效抗氧化活性成分峰,并采用液质联用鉴定它们的化学结构;对蒲葵子进行植物化学细分工作,并对获得的化合物进行体外抗癌活性筛选及动物移植瘤体内抗肿瘤验证实验;考察蒲葵子主要活性成分的体内药代动力学行为;建立评价蒲葵子药材质量的含量测定、指纹图谱方法等。其主要研究内容及学术贡献如下:1、对蒲葵子药材进行了本草考证,包括原植物形态、分布地域、药材性状、显微特征、理化鉴定和含量测定等研究,为蒲葵子的药用提供生药学资料。2、对蒲葵子进行初步提取、分离,得到不同极性提取部位;采用体外人肿瘤细胞筛选各部位抗肿瘤活性,证实乙酸乙酯、正丁醇部位抗癌活性较好,并采用移植性实体瘤来验证其体内抑癌活性;这为后续的以活性为导向的植物化学细分工作提供了依据。3、建立HPLC-DPPH抗氧化活性筛选法,用于天然产物的抗氧化活性成分高效筛选研究。并应用该法首次对蒲葵子中的抗氧化活性成分进行了高通量筛选,证实蒲葵子中有7个主要成分具有强的抗氧化活性。本研究揭示了蒲葵子的抗氧化活性作用,并首次明确了主要的抗氧化活性成分峰,也为天然产物的抗氧化活性成分筛选提供了可行手段。4、基于HPLC-DPPH的抗氧化活性筛选结果,采用液相色谱-质谱法(LC-MS)分析了主要的抗氧化活性成分峰,解析其质谱碎片,推导其裂解规律,初步鉴定了总提物中的6个主要抗氧化活性成分,其中有5个成分为首次从该植物中发现。5、对蒲葵子提取物进行植物化学细分研究,分离得到了25个化合物。利用1~H-NMR,(13)~C-NMR,Mass及IR等光谱分析,鉴定了18个化合物的结构;8个化合物为首次从蒲葵子中分离得到,其中3个化合物为首次从该科植物中分离得到。6、对分离得到的组分及化合物进行体外抗癌活性筛选,证实苜蓿素具有较好的抑癌细胞生长活性;通过AO/EB荧光染色、DNA断裂琼脂糖凝胶电泳分析、免疫组化染色法检测CDX2的表达、流式细胞仪检测细胞周期、Western Blot分析Bcl-2和Bax蛋白表达,从而研究苜蓿素对细胞的诱导凋亡作用,并进行体内抗肿瘤活性研究,验证了其体内抑癌活性。本研究揭示苜蓿素可能是蒲葵子的抗癌作用主要成分之一。7、建立HPLC法检测大鼠血浆中苜蓿素浓度的方法,首次研究了口服苜蓿素在大鼠体内的血浆药代动力学行为。本研究为探明抗癌活性成分苜蓿素的体内过程提供了参考。8、以分离得到的6个主要化合物作为含量测定指标,建立同时测定6个成分的HPLC-UV方法,并分析了10个不同产地蒲葵子中的6个指标性成分的含量,为该草药的质量控制提供了的定量评价方法。9、建立蒲葵子的HPLC-UV指纹图谱分析方法,考察了方法的精密度、重现性和稳定性,并考察了10批多个产地的蒲葵子药材指纹图谱一致性,本研究为蒲葵子药材的鉴别及质量控制提供了较全面的定性评价手段。
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全文目录
英文缩略词表 4-6 中文摘要 6-8 Abstract 8-11 前言 11-15 第一章 蒲葵子的生药学研究 15-26 1 蒲葵原植物形态研究 15-16 2 蒲葵子性状研究 16 3 蒲葵子的显微鉴别研究 16-19 4. HPLC 测定蒲葵中苜蓿素的含量 19-25 5 小结 25-26 第二章 蒲葵子的粗分和活性筛选 26-46 1 化学成分的预试 26-30 2 蒲葵子提取和部位的分离 30 3 各部位体外抗肿瘤活性的筛选 30-35 4 各部位体内抗肿瘤活性研究 35-38 5 蒲葵子抗氧化活性筛选 38-46 第三章 蒲葵子化学成分研究 46-78 (一) 蒲葵子提取物的 LC-MS 分析 46-55 (二) 化学成分分离与鉴定 55-78 第四章 抗肿瘤活性研究 78-97 1 各组分体外抗肿瘤活性研究 78-89 2 苜蓿素体内抗肿瘤活性研究 89-97 第五章 苜蓿素在大鼠血浆中的药代动力学研究 97-104 1 材料 97 2 实验方法 97-98 3 结果 98-102 4 讨论 102-103 5 小结 103-104 第六章 蒲葵子质量控制研究 104-121 (一) 蒲葵子指纹图谱的建立 105-115 (二) 主要成分的含量测定 115-121 总结与展望 121-123 参考文献 123-130 在读期间发表的论文 130-131 致谢 131-132 综述 132-160 参考文献 146-160 附图 160-170
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中图分类: > 医药、卫生 > 中国医学 > 中药学 > 中药化学 > 化学分析与鉴定
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