学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

刺山柑热休克蛋白基因克隆及原核表达

作　者: 栾东东
导　师: 董玉芝
学　校: 新疆农业大学
专　业: 林木遗传育种
关键词: 刺山柑 RNA提取 热激蛋白 RACE 原核表达 温度胁迫
分类号: Q943.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2008年
下　载: 81次
引　用: 2次
阅　读: 论文下载
 

内容摘要


热休克蛋白(heat shock protein, HSP)是植物体内最重要的一类逆境诱导蛋白,它们在逆境条件,尤其是温度胁迫下迅速合成,使细胞免受损害。HSP具有分子伴侣功能,参与各种各样的细胞代谢过程,它们还与植物抗热、抗冷以及抗氧化性密切相关。因此,热激基因是育种工作中具有重要实用价值的优良基因资源。刺山柑(Capparis spinosa)作为干旱区特有植物,具有极强的干旱适应性,它抗旱、耐高温、耐风蚀、耐瘠薄,其生存的基本环境,总是与干旱背景中比较原始的荒漠土壤相联系,这些特点使刺山柑成为育种工作中不可多得的优良抗逆基因的供体,对刺山柑的抗逆基因资源进行开发和利用具有重要的实践意义。RNA提取是基因工程研究当中的重要环节,RNA质量的优劣是基因克隆成败的关键,通过实验,我们确立了一种最合适的提取刺山柑叶片总RNA的改良SDS法,该方法具有成本低、时间短、获得的RNA产量高、质量好等特点。利用RT-PCR结合cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends, RACE)方法,我们成功的从刺山柑叶片中分离了HSP基因家族的一个HSP70基因(CsHSP70)和一个sHSP基因(CsSHSP),并在Genebank上注册,登录号分别为EU574936和EU574935。CsHSP70基因全长2202bp,ORF共1950bp,编码649个氨基酸,表达产物分子量为71.0446kD,序列分析表明该基因属于HSP70基因家族。CsSHSP基因全长917bp,ORF共678bp编码225个氨基酸,表达产物分子量为25.119kD,序列分析表明该基因属于叶绿体sHSP基因家族。我们构建了CsHSP70和CsSHSP基因的原核表达载体,并使重组质粒PGEX-4T-2-CsHSP70和PGEX-4T-2-CsSHSP在大肠杆菌中异源表达,通过细胞温度胁迫实验证明,它们异源表达可提高大肠杆菌耐高温(50℃)和低温(4℃)的能力。

全文目录


摘要  3-4
Abstract  4-11
第一章 前言  11-19
  1.1 HSP 研究进展  11-18
    1.1.1 HSP 的保守性  12
    1.1.2 HSP 的多样性  12-13
    1.1.4 HSP 的功能  13-16
    1.1.5 HSP 基因的结构特征  16-17
    1.1.6 HS 基因表达的调控  17-18
  1.2 本研究的目的、意义  18-19
第二章 刺山柑叶片总RNA 提取方法的确立  19-29
  2.1 实验材料  20
    2.1.1 材料  20
    2.1.2 所需试剂  20
  2.2 实验方法  20-25
    2.2.1 改良TRIZOL 法  20-21
    2.2.2 改良CTAB 法  21
    2.2.3 改良SDS 法  21-22
    2.2.4 常规方法  22
    2.2.5 RNA 纯度检测  22
    2.2.6 RNA 完整性检测  22
    2.2.7 RNA 质量检测  22-25
  2.3 结果与分析  25-28
    2.3.1 RNA 纯度检测  25-26
    2.3.2 RNA 完整性检测  26-27
    2.3.3 RNA 质量检测  27-28
  2.4 本章小结  28-29
第三章 刺山柑CSHSP70 基因克隆、分析及原核表达  29-62
  3.1 实验材料  29-30
    3.1.1 植物材料  29
    3.1.2 试剂  29-30
  3.2 实验方法  30-45
    3.2.1 总RNA 的提取  30
    3.2.2 反转录合成第一链cDNA  30
    3.2.3 CsHSP70 中间片段的获得  30-33
    3.2.4 CsHSP70 3′端与5′端的获得  33-39
    3.2.5 CsHSP70 全序列的拼接与分析  39-40
    3.2.6 CsHSP70 基因的原核表达  40-45
  3.3 结果与分析  45-61
    3.3.1 CsHSP70 中间片段的获得  45-46
    3.3.2 CsHSP70 3′端和5′端的获得  46-51
    3.3.3 CsHSP70 序列的拼接与分析  51-56
    3.3.4 CsHSP70 的原核表达  56-61
  3.4 本章小结  61-62
第四章 刺山柑CSSHSP 基因克隆、分析及原核表达  62-88
  4.1 实验材料  62
    4.1.1 植物材料  62
    4.1.2 试剂  62
  4.2 实验方法  62-71
    4.2.1 总RNA 的提取  62
    4.2.2 反转录合成第一链cDNA  62
    4.2.3 CsSHSP 中间片段的获得  62-63
    4.2.4 CsSHSP 3′端与5′端的获得  63-67
    4.2.5 CsSHSP 全序列的拼接与分析  67
    4.2.6 CsSHSP 基因的原核表达  67-71
  4.3 结果与分析  71-87
    4.3.1 CsSHSP 中间片段的获得  71-74
    4.3.2 CsSHSP 3′端和5′端的获得  74-76
    4.3.3 CsSHSP 序列的拼接与分析  76-83
    4.3.4 CsSHSP 的原核表达  83-87
  4.4 本章小结  87-88
第五章 结论与展望  88-89
  5.1 结论  88
  5.2 展望  88-89
参考文献  89-98
致谢  98-99
作者简介  99

相似论文

  1. 拟南芥胱硫醚-γ-合成酶（D-AtCGS）基因在大肠杆菌中的表达及抗血清制备,Q943.2
  2. 南极冰藻GPx、GST和SAHH基因的克隆、定量分析及原核表达载体的构建,Q943.2
  3. 草鱼呼肠孤病毒vp5、vp7基因cDNA的克隆、表达及VP5、VP7蛋白亚细胞定位研究,S941.41
  4. 草鱼呼肠孤病毒vp6和ns38基因的克隆、表达及VP6和NS38免疫原性研究,S941.41
  5. 小麦黄花叶病毒（WYMV）RNA2编码基因的功能研究,S435.121
  6. 红笛鲷清道夫受体B型Ⅰ类和抗冻蛋白Ⅱ型基因的克隆、表达与定量分析,S917.4
  7. 羊种布鲁氏菌16M优势蛋白抗原的鉴定,S852.61
  8. 棉花纤维初始发育期14-3-3相互作用蛋白的酵母双杂交筛选,S562
  9. 鸡传染性支气管炎病毒的分离鉴定及S1、N基因的序列分析,S852.65
  10. 猪细小病毒河南流行株的分离、鉴定及部分生物学特性研究,S852.65
  11. 人源β-防御素-6的原核表达及纯化,Q78
  12. 圆眼珍珠蛙（Lepidobatrachus laevis）皮肤cDNA文库的构建、筛选及胰蛋白酶抑制剂的原核表达和活性研究,Q78
  13. 新型菊酯类农药降解酶的生化鉴定及分子改造研究,X172
  14. 棉铃虫与烟夜蛾寄主选择机制的比较研究,S435.622.3
  15. 碱蓬DREB同源基因的克隆与功能分析,Q943.2
  16. 不结球白菜耐热性鉴定方法及其耐热基因片段克隆研究,S634
  17. 萝卜耐热性鉴定与热激蛋白基因克隆,S631.1
  18. 兔源支气管败血波氏杆菌PRN蛋白的表达及其免疫保护性研究,S855.12
  19. 兔支气管败血波氏杆菌fimN基因的克隆表达及快速检测方法的建立,S858.291
  20. 栽培大豆和滩涂野大豆及其杂交后代苗期耐盐性与NHX1基因功能的初步研究,S565.1
  21. 新疆沙冬青（Ammopiptanthus nanus）抗寒相关基因的分子克隆及表达分析,S793.9

中图分类: > 生物科学 > 植物学 > 植物细胞遗传学 > 植物基因工程
© 2012 www.xueweilunwen.com