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甲氨蝶呤联合环磷酰胺对Wistar大鼠淋巴细胞细胞周期和凋亡的影响

作　者: 王鑫
导　师: 李小峰
学　校: 山西医科大学
专　业: 风湿免疫学
关键词: 甲氨蝶呤环磷酰胺淋巴细胞细胞周期凋亡
分类号: R96
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

研究背景和目的类风湿关节炎（RA）有许多类肿瘤的特性,其发病机制与滑膜细胞、淋巴细胞的细胞周期失控和凋亡异常密切相关。我们受血液病（白血病）治疗策略的启发,在治疗RA的临床实践中,依据肿瘤联合化疗的理论,联合细胞周期特异性药物甲氨蝶呤（MTXMethotrexate）与周期非特异性药物环磷酰胺（CTX Cyclophosphamide）小剂量间歇给药治疗RA,回顾性分析初步显示此联合方案疗效显著,副作用低。检索国内外文献,目前尚无根据细胞动力学原理联合免疫抑制剂治疗RA的理念。本课题通过研究MTX、CTX及两药联合对正常Wistar大鼠外周血淋巴细胞（PBL）细胞周期、凋亡率的影响,探讨两药联合是否具有协同作用;通过检测PBL和免疫器官脾脏的细胞周期蛋白D1（CyclinD1）的表达水平,阐明联合方案是否通过CyclinD1途径实现对细胞周期的影响。并初步探讨两药联合的可能机制,为临床用药提供理论依据。方法1、成年Wistar大鼠随机分为四组:正常对照组、小剂量MTX组、小剂量CTX间歇给药组、联合用药组（小剂量MTX+小剂量CTX间歇给药）。2、分别于给药3周、9周、18周、27周后采集外周血,应用流式细胞术（FCM）检测PBL的细胞周期、凋亡率及CyclinD1表达水平。3、给药27周后解剖大鼠,应用免疫组化检测脾脏组织CyclinD1的表达。结果1、对细胞周期各期细胞比例的影响:小剂量MTX组PBL G0/G1期细胞比例明显高于正常对照组（P＜0.05）,S期细胞比例明显低于正常对照组（P＜0.05）;小剂量CTX组对PBL各期细胞比例影响不大;联合用药组与小剂量MTX组比较,G0/G1期细胞比例明显降低（P＜0.05）,S期细胞比例明显升高（P＜0.05）;经析因设计的方差分析显示两药对G0/G1期、S期细胞比例的影响表现为拮抗作用（P＜0.05）;各采血时点间对PBL细胞周期各期细胞比例的影响无统计学差异。2、对凋亡的影响:两单用药组PBL凋亡率与正常对照组比较均明显升高,联合用药组增高更为显著（P＜0.05）,经析因设计的方差分析显示两药对PBL凋亡率的影响有协同作用（P＜0.05）。各采血时点间对PBL凋亡率的影响无统计学差异。3、对CyclinD1表达的影响:不同用药组PBL CyclinD1的表达和脾脏CyclinD1免疫组化的平均光密度均值均无统计学差异。各采血时点间对PBL CyclinD1表达的影响无统计学差异。4、PBL CyclinD1的表达与G0/G1期细胞比例呈负相关（P＜0.05）,脾脏CyclinD1免疫组化的平均光密度均值与相应时点PBL G0/G1期细胞比例呈负相关（P＜0.05）。结论1、小剂量MTX对大鼠PBL的影响主要表现为细胞周期G₀/G₁→S期转换延缓作用,也可诱导凋亡。2、小剂量CTX对大鼠PBL细胞周期各期细胞比例无明显影响,主要为明显的诱导凋亡作用。3、MTX使大鼠PBL G0/G1期细胞比例明显增高,两药联合通过更加有效地诱导阻滞于G0/G1期的细胞凋亡而发挥协同效应。4、MTX、CTX联合方案在本研究的采血时点对正常大鼠淋巴细胞细胞周期的影响可能并非通过CyclinD1途径来实现。

全文目录

中文摘要  5-7
英文摘要  7-9
正文  9-28
  前言  9-11
  材料与方法  11-14
  结果  14-18
  讨论  18-22
  结论  22-23
  参考文献  23-25
  附图  25-28
综述  28-35
  正文  28-33
  参考文献  33-35
个人简历  35-36
致谢  36

甲氨蝶呤联合环磷酰胺对Wistar大鼠淋巴细胞细胞周期和凋亡的影响

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