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甲基转移酶抑制剂对肺腺癌细胞生长及XAF1基因表达影响的研究

作　者: 苏永超
导　师: 陈勇兵
学　校: 苏州大学
专　业: 胸心外科
关键词: 5-氮杂-2’-脱氧胞苷 肺癌A549细胞株 细胞增殖 细胞凋亡 甲基化 XAF1基因
分类号: R734.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2011年
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内容摘要


目的:5-氮杂-2’-脱氧胞苷(5– aza-2’-deoxycytidin,5-Aza-CdR)是一种甲基转移酶抑制剂,体外实验研究表明5-Aza-CdR能抑制多种肿瘤细胞的增殖并促进细胞凋亡,在多种肿瘤细胞中促进不同肿瘤抑制因子高表达。XAF1是近年来研究发现的新型肿瘤抑制基因,因基因高甲基化在许多肿瘤细胞或组织中呈低表达。本研究旨在探明甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR对于肺腺癌A549细胞增殖、凋亡等生物学行为及细胞中抑癌基因XAF1表达水平的影响,初步探讨甲基转移酶抑制剂对肺腺癌细胞生长增殖的影响及可能机制。方法:本实验通过培养肺腺癌A549细胞,分别以1.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L的5-氮杂-2’-脱氧胞苷药物干预细胞,以此分为低浓度、中浓度、高浓度三组,并以相同体积的PBS、药物溶解介质干预细胞,分别作为空白组和对照组。分别于干预后24、36、48小时后采用MTT比色法检测细胞增殖情况变化,并于干预48h后用Annexin V/PI双染色法,流式细胞仪检测细胞凋亡情况。并于干预后48h采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测细胞中XAF1mRNA的表达水平变化,采用蛋白免疫印记(Western Blot)检测细胞中XAF1蛋白表达水平变化;结果:MTT检测结果显示干预48h后1.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L浓度组细胞增殖抑制率分别为0.35±0.03、0.53±0.04、0.64±0.02,较空白组及对照组明显增高(P<0.01),空白组与对照组之间无统计学意义(P>0.05),且同浓度组细胞增殖抑制率随药物作用时间延长而增高(P<0.05),FCM检测结果显示三种不同浓度组细胞凋亡率分别为7.85%±1.39%、15.06%±2.07%、22.43%±2.45%,较空白组(5.06%±1.03%)及对照组(4.99%±1.08%)增高(P<0.05),空白组与对照组之间无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR检测结果显示1.0μmol/L、5.0μmol/L、10.0μmol/L组XAF1mRNA表达水平分别为3.19±0.71、2.11±0.86、1.41±0.24较空白组(3.96±0.78)及对照组(3.99±0.41)增强(P<0.05),高浓度组较低浓度组XAF1mRNA表达增强(P<0.05),中浓度组与其他两组之间、空白组及对照组之间无统计学意义(P>0.05);Western Blot结果显示三种不同浓度组的蛋白表达量分别为0.32±0.04、0.37±0.01、0.47±0.06较空白组(0.08±0.01)及对照组(0.09±0.03)增强(P<0.05),高浓度组较低浓度组中XAF1蛋白表达增强(P<0.05),中浓度组与其他两组之间无统计学意义(P>0.05),空白组及对照组之间无统计学意义(P>0.05)。结论:甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2’-脱氧胞苷对肺腺癌A549细胞有增殖抑制和促进细胞凋亡的作用,同时上调A549细胞中抑癌基因XAF1的表达水平, 5-氮杂-2’-脱氧胞苷对A549细胞恶性生物学行为的这种逆转作用可能与其上调抑癌基因XAF1表达有关。

全文目录


中文摘要  4-6
Abstract  6-9
序言  9-11
第一部分 甲基转移酶抑制剂对肺腺癌A549 细胞生长状态的影响  11-19
  前言  11
  1 实验材料  11-12
  2 试验方法  12-14
  3 统计学处理  14
  4 结果  14-16
  5 讨论  16-19
第二部分 甲基转移酶抑制剂对A549 细胞中XAF1 基因表达的影响  19-32
  前言  19
  1 实验材料  19-21
  2 试验方法  21-28
  3 统计学处理  28
  4 结果  28-29
  5 讨论  29-32
本实验局限性及意义  32-33
结论  33-34
附图  34-38
参考文献  38-43
攻读学位期间公开发表的论文  43-44
综述  44-56
  参考文献  51-56
中英文对照缩略词表  56-57
致谢  57-58

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中图分类: > 医药、卫生 > 肿瘤学 > 呼吸系肿瘤 > 肺肿瘤
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