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红毛藻及坛紫菜藻红蛋白的分离纯化与相关性质的研究

作　者: 付晓苹
导　师: 曹敏杰
学　校: 集美大学
专　业: 食品科学
关键词: 红毛藻坛紫菜藻红蛋白纯化性质研究
分类号: TS201.2
类　型: 硕士论文
年　份: 2007年
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内容摘要

本研究以营养价值高且蛋白质含量丰富的红毛藻为原材料,通过硫酸铵分级盐析和阴离子交换柱层析两种方法结合,快速高效地分离纯化红毛藻藻红蛋白,并对该蛋白的光谱学性质,亚基组成,稳定性,抗氧化性及食用安全性等进行研究。此外,为了对藻红蛋白的性质作深入了解,本研究还从坛紫菜中分离纯化藻红蛋白,并对这两种藻红蛋白的性质进行了比较分析。本实验首次采用盐浓度线性梯度和pH值线性梯度相结合的混合梯度方式对吸附于DEAE-Sepharose阴离子交换柱的蛋白进行洗脱,从而分离纯化得到高纯度藻红蛋白。最终纯化的红毛藻藻红蛋白的纯度系数(A565/A280)为4.5,得率约为0.8 g/100 g红毛藻;坛紫菜藻红蛋白的纯度系数为3.6,得率约为0.1 g/100 g坛紫菜。根据其可见光光谱学特征判断两种藻红蛋白均属于R-藻红蛋白,荧光发射峰位于572 nm左右。红毛藻藻红蛋白的α、β和γ亚基的相对分子质量分别约为19 kDa、21 kDa和27 kDa。坛紫菜藻红蛋白的α、β和γ亚基的相对分子质量分别约为21 kDa、22 kDa和32 kDa。稳定性实验结果表明:藻红蛋白在pH值为中性及偏酸性时,具有较好的稳定性,pH值为强碱性时,蛋白不稳定。藻红蛋白在温度低于50℃时具有良好的稳定性。短时间可见光、紫外光照射对藻红蛋白的吸收光谱特征影响较小,而短时间红外光照射对蛋白稳定性有一定程度的破坏,故要长时间保存该蛋白仍须低温、避光。此外,微波对藻红蛋白有较强的破坏力。藻红蛋白具有抗氧化活性,特别是红毛藻藻红蛋白具有很强的清除羟基自由基和过氧化氢的能力。红毛藻藻红蛋白对羟基自由基的半数清除率(IC50)为1.2μg/mL,对过氧化氢的半数清除率为4.8μg/mL。坛紫菜藻红蛋白对羟基自由基的半数清除率为11.5μg/mL,但是,坛紫菜藻红蛋白清除过氧化氢的能力未被检测到。红毛藻藻红蛋白的急性毒性实验表明该蛋白的毒性极低。

全文目录

中文摘要  4-5
Abstract  5-9
第一章引言  9-16
  1.1 藻胆蛋白及藻红蛋白  9-10
  1.2 藻红蛋白的基本性质  10-11
  1.3 藻红蛋白的研究现状  11-12
  1.4 藻红蛋白的应用  12-13
  1.5 红毛藻与坛紫菜  13
  1.6 研究的目的与意义  13-14
  1.7 研究内容与技术路线  14-16
第二章材料与方法  16-27
  2.1 原材料  16
  2.2 试剂  16
  2.3 实验所用溶液及其配制  16-19
  2.4 仪器  19-20
  2.5 实验方法  20-27
第三章红毛藻藻红蛋白的实验结果与分析  27-44
  3.1 红毛藻藻红蛋白的分离纯化结果  27-30
  3.2 红毛藻藻红蛋白的相关性质分析  30-44
第四章坛紫菜藻红蛋白的实验结果与分析  44-55
  4.1 坛紫菜藻红蛋白的分离纯化结果  44-45
  4.2 坛紫菜藻红蛋白的相关性质分析  45-55
第五章讨论  55-59
结论  59-60
致谢  60-61
参考文献  61-66
在学期间发表的学术论文目录  66

红毛藻及坛紫菜藻红蛋白的分离纯化与相关性质的研究

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