学位论文 > 优秀研究生学位论文题录展示

日本血吸虫感染免疫调节机理的探索：小鼠自然感染模型中CD4~+T细胞的应答特征及其相关分子机理的研究

作　者: 季旻珺
导　师: 吴观陵
学　校: 南京医科大学
专　业: 病原生物学
关键词: 日本血吸虫 CD4~+T细胞免疫应答极化干扰素刺激基因细胞凋亡负调控分子 IGTP基因流式细胞术基因芯片
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 159次
引　用: 1次
阅　读: 论文下载

内容摘要

目前，血吸虫病防治面临的棘手问题之一在于再感染难以控制，人们一直期待采用人用疫苗作为化疗重要的补充手段进行疾病控制，因此，血吸虫感染宿主的免疫应答规律作为疫苗研制的理论基础受到更多关注。宿主感染血吸虫后，可诱导机体产生针对血吸虫的抗感染免疫力，即获得性免疫力。CD4~+ T细胞在血吸虫感染的保护性免疫中起着重要作用。对大鼠、灵长类动物和人类血吸虫病的研究发现，血吸虫感染获得性抗力的表达主要是依靠抗体依赖、细胞介导的细胞毒(ADCC)作用对幼虫的杀灭机制；并且伴有IgE抗体水平和外周血嗜酸性粒细胞的增高。由于Th2型细胞因子IL-4和IL-5可促进IgE抗体的产生和嗜酸性粒细胞的活化，从而增强ADCC的杀虫效应。因此，人和大鼠的保护性免疫力主要与Th2型应答相关。这与人类的遗传学研究中发现的抗力基因图谱相一致，并且在一系列的曼氏和埃及血吸虫病免疫流行病学和大鼠曼氏血吸虫感染模型研究中得到证实，但是这种Th2型应答仅能提供部分、不完全的保护力。在小鼠曼氏血吸虫病模型中，观察到非抗体依赖的，以IFN-γ激活巨噬细胞为中心的Th1型应答。但是在人群曼氏血吸虫和埃及血吸虫病的免疫流行病学研究也发现了Th1型应答在保护性免疫中的作用，表现为血吸虫特异性IFN-γ水平与获得性抵抗力有显著正相关。IFN-γ对再感染抗力的作用机制可能是通过增强血小板膜表面的IgE受体表达，从而使IgE依赖的血小板介导的ADCC作用增强，提高杀虫效应；此外，IFN-γ还可诱导大量参与杀虫效应的分子编码基因的表达，如可诱导一氧化氮合成酶、肿瘤坏死因子α以及某些趋化因子等。辐照尾蚴免疫小鼠可诱导出人们所期待的高保护力，其效应机制主要是南京医科大学博士学位论文辐照尾坳可激发宿主高水平的IFN一Y应答。日本血吸虫感染的获得性杭力有其特殊性。与曼氏和埃及血吸虫感染相比，日本血吸虫感染的抗力表达更缓慢，且免疫记。}乙时间更短。口，5]等对湖南洞庭湖地区日本血吸虫流行区的研究中认为，IgE杭体不作为重要因素参与日本血吸虫的保护性应答，也没有更多的证据支持IgE抗体增加与日本血吸虫获得性抗力有直接相关性[26]。在细胞免疫水平，沈蕾等对江西都阳湖地区日本血吸虫流行区的观察发现，流行区人群细胞免疫应答水平总体被下调，尤其在感染组人群。对日本血吸虫再感染研究发现，抗力人群中IFN一Y的表达水平高于感染组人群，提示IFN一Y可能与日本血吸虫获得性杭力有关。综上所述，Thl型和ThZ型细胞因子在抗感染保护力中的确切作用并不明确，很可能在不同宿主，甚至有时是同一宿主观察到不同Th细胞效应的表达。这表明寄生虫与宿主之间复杂的相互作用不仅仅限于单一Thl型或ThZ型效应应答。血吸虫感染获得性免疫力的表达可能是Thl和ThZ细胞的协调活动，取得动态平衡的结果。宿主可以通过自然感染来获得对血吸虫的免疫力，因此发展抗血吸虫感染的疫苗是可行的。得到一个成功的疫苗的先决条件不仅要找到合适的疫苗杭原，而且这种抗原要能在机体诱导高水平的保护性免疫力。近年来，随着分子生物学技术的兴起，在若千国内外实验室内已克隆和表达了一系列日本血吸虫抗原基因。然而，迄今为止，疫苗研制工作均无突破性进展，所获得的疫苗候选分子的免疫保护力难以稳定达到40%的减虫率。理论上说，现有的疫苗是复制“伴随免疫”和ADCC机理，应当有效，但是实验证明这些疫苗仅能提供部分的保护力，是不完全的免疫。目前，在疫苗的研制和应用中还存在有争议之处，疫苗的接种是诱导宿主的Thl型应答，还是向ThZ型应答优势分化。依据人群获得性抗力的免疫机理，主张发展宿主的ThZ型应答作为疫苗开发的原则，如以保护性抗体筛选有效杭原表位;然而用辐照尾坳免疫动物显示高水平的Thl型应答与抗感染保护性相关，提示疫苗的研制应以增强Thl型应答为主。对于日本血吸虫感染是否能够产生有效保护力的疑惑，以及日本血吸虫疫苗研究中存在的种种不确定性，迫切需要明确日本血吸虫自然感染过程中宿主免疫应答的自然规律，特别是免疫调节机理，以明确CD4+T细胞在日本血吸虫感染中的有效保护性效应及作用机制，为南京医科大学博士学位论文将来有可能通过有目的的定向诱导T细胞极化，或恢复Thl/Th2细胞的平衡，或在免疫细胞水平进行人工干预以解决化疗后再感染的问题，以及开发Th优势分化的杭日本血吸虫病疫苗和疫苗应用策略提供有益的免疫学理论依据。本研究首先建立日本血吸虫慢性自然感染的小鼠模型，以三色流式细胞术检测不同感染时期(虫卵沉积前期、感染急性期、感染慢性期)CD4+T细胞中IFN一Y和IL一4细胞因子的蛋白表达水平，以此来观察Thl、ThZ细胞随感染发展的动态变化;采用Affymetrix公司的小鼠基因组U74A基因芯片，以不同感染时期纯化的CD4+T细胞为实验材料，快速、并行、高效地检测CD4+T细胞中的基因转录水平，立足于全基因组，考察CD旷T细胞在日本血吸虫慢性感染中的行为特征;以 RT一PC

全文目录

一、摘要  4-15
  1 中文摘要  4-9
  2 英文摘要  9-15
二、研究内容  15-130
  (一) 日本血吸虫自然感染小鼠模型中CD4~+T细胞的应答特征  15-103
    1 前言  15-21
    2 材料和方法  21-48
    3 结果和讨论  48-103
      ① 主要方法的质量控制与评价  48-61
      ② 日本血吸虫感染的自然特征:Th2型应答极化  61-71
      ③ Th1型应答下调的重要因素:干扰素通路的抑制  71-82
      ④ Th2型应答效应:抗体应答及其他  82-90
      ⑤ 免疫应答的其他调节机制的探讨Ⅰ:CD4~+T细胞的凋亡  90-98
      ⑥ 免疫应答的其他调节机制的探讨Ⅱ:负调控分子的高表达  98-103
  (二) 干扰素-γ通路中特异性GTP酶(IGTP)的分子克隆和序列测定  103-130
    1 前言  103-105
    2 材料和方法  105-118
    3 结果  118-125
    4 讨论  125-130
三、结语  130-132
四、参考文献  132-148
五、附录  148-149
六、致谢  149-151
七、综述  151-160

日本血吸虫感染免疫调节机理的探索：小鼠自然感染模型中CD4~+T细胞的应答特征及其相关分子机理的研究

内容摘要

全文目录

相似论文