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日本血吸虫重组亚单位疫苗的研究

作　者: 罗秀菊
导　师: 曾宪芳；易新元
学　校: 中南大学
专　业: 病原生物学
关键词: 日本血吸虫克隆表达免疫保护
分类号: R392
类　型: 硕士论文
年　份: 2003年
下　载: 67次
引　用: 1次
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内容摘要

目的为寻找有价值的血吸虫疫苗候选抗原分子，本课题从候选基因筛选、克隆和表达及免疫保护性评价方面进行了初步探索。方法 1 用日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原(SjHmAg)免疫兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库，并对阳性克隆的插入片段进行PCR扩增及测序，利用互联网对测序结果进行同源性比较分析，并预测蛋白质结构与功能；2 将SjCAI基因亚克隆至pCEX-5X-3载体，分别将此重组质粒pGEX-SjCAI，以及本室已构建的重组质粒pGEX-Sj31b、pGEX-Sj31c转化感受态大肠杆菌ER2566，在IPTG诱导下进行表达，分别将表达产物免疫小鼠，并观察免疫保护效果。结果 1 经三轮筛选，获10个阳性克隆，对其中3个阳性克隆测序的结果显示，1个与Sj原肌球蛋白基因序列显著同源，另两个为新基因片段，命名SjHm1、SjHm2；2 构建了重组质粒pGEX-SjCAI，在大肠杆菌中高效表达了融合蛋白SjGST-CAI、SjGST-31b和SjGST-31c，分别将其免疫小鼠，诱导产生了29.87％、22.71％和13.6％的减虫率，减卵率分别为63.74％、54.21％及45.01％。结论 1 SjHml、SjHm2编码蛋白有可能作为血吸虫病疫苗候选抗原分子，其免疫保护作用有待进一步研究；2 rSjGST-31b、rSjGST-31c能诱导部分抗日本血吸虫免疫保护力，而rSjGST-31b的免疫效果优于rSjGST-31c；3 SjCAI基因亚克隆至pGEX-5X-3载体后可在大肠杆菌中高效表达，表达产物rSjGST-CAI具有明显的抗生殖免疫力和较好的抗尾蚴攻击感染的保护性免疫，有望成为血吸虫病疫苗新的候选抗原分子。

全文目录

正文  10-43
  第一章日本血吸虫肝门型童虫表膜抗原(SjHmAg)免疫兔血清筛选日本血吸虫成虫cDNA文库  10-22
    1.1 材料与方法  10-12
    1.2 结果  12-20
    1.3 讨论  20-22
  第二章重组日本血吸虫GST-31蛋白对小鼠的免疫保护性研究  22-30
    2.1 材料与方法  22-24
    2.2 结果  24-28
    2.3 讨论  28-30
  第三章日本血吸虫CAI基因的亚克隆表达与免疫保护效果测定  30-39
    3.1 材料与方法  30-32
    3.2 结果  32-37
    3.3 讨论  37-39
  参考文献  39-43
综述  43-52
致谢  52-53
发表论文及获得奖励  53

日本血吸虫重组亚单位疫苗的研究

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